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文献和实验技术、TALEN技术和CRISPR/Cas9技术的基因敲除研究。 实验流程1. 基因组DNA的准备：提取野生型和突变型细胞的基因组DNA。Genloci公司专为阳性克隆筛选设计的TNA抽提试剂盒也能帮您的忙，只需500个左右的细胞即可提取全基因组DNA。 2. 杂交DNA的准备：a) PCR引物设计：一般扩增产物长度为300~600 bpb) PCR扩增：获得杂交DNA 3. Cruiser™酶筛选阳性克隆：无需纯化DNA，直接使用PCR产物，混合体系后45℃下反应15~20 min K562
1.3.1.偶联时间：2h 1.3.2.封闭时间：1h 1.4. 封闭要求：封闭时间不宜小于1h。 2. 偶联流程 2.1. 配制偶联实验所用的缓冲液，分别有以下几种： 2.1.1 偶联液：100mM MES pH4.8 2.1.2 封闭液：3M Ethanolamine，1%BSA，0.5%T-20，pH8.0 2.1.3 保存液：0.05%proclin-300的PBS缓冲液或者根据自己的需求配制其他缓冲液。 2.2. 先将磁珠用旋涡
Preparation of DNA Template For Direct Sequencing of Large Insert PAC and BAC Plasmid
(most critical timed step). 5. Add 300 ul of cold Qiagen buffer R3 (neutralization buffer) per well. Seal wells with plastic sealing tape and mix by gentle inversion 5 times. Incubate on ice for 5 minutes. 6. Add 50 ul of ProCipitate™ (LigoChem
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