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Myosin Light Chain Preparation

Buffer A.Homogenizing Buffer: 28 liters: 50 mM KCl,20 mM Tris (pH 8.0),15 mM MCE, 0.2 mM MgAc2 (350 ml 4 M KCl,280 ml 2 M Tris,28 ml 15 M MCE,1.20 g MgAc2) Buffer B.Triton X-100 Buffer: 4 liters of Buffer A plus 40 ml X-100 (1% Triton final) Buffer C

Purification of Myosin Light Chain Kinase

7.0 4.Buffer C DE 52 Elution 10 mM MOPS- 5ml of 2M stock solution 1 liter 1 mM EDTA- 5ml of 0.2M stock solution 200 mM MaCl- 11.7g 1 mM DTT* - 1ml of 1M stock solution 0.1 mM PMSF* - 1.75ml of 10mg/ml stock solution pH 7.0 5.Buffer D Dialysis 10 mM MOPS

WB实战指南（四）之 难点：抗体孵育

文献的话很容易找到这家公司的。可惜，在国内代理商不可能提供相应的服务，因此购买他们的商品存在不小的风险。所以，通常我更推荐sigma和Abcom、R&D等。诸如Sigma公司销售的Actin，cat. A5316，clone AC-74，Mab更是作为新手练习专用的抗体；它的背景很低，效价很高，可以1：30,000稀释（是普通一抗效价的30倍）。此外，尽管cell signaling是做磷酸化抗体起家的公司，但它们的抗体的质量总体感觉也不好，所以有其它公司可以选择时，我们会刻意避免购买cell