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文献和实验获得,价廉,最好已商品化4.组织中不应存在内源性酶或类似物质5.酶应稳定,标记后保持酶和抗体的活性缺点 酶与抗体共价结合损害部分抗体和酶的活性三步法(HRP labelled)多层反应法Alkaline Phosphatase - Anti-Alkaline Phosphatase (APAAP) Technique过氧化物酶抗过氧化物酶法(Peroxidase Antiperoxidase ,PAP法)• 原理与酶桥法相似• 制备PAP复合物: 使抗HRP抗体与HRP形成可溶性复合物PAP复合
必须稳定,不能弥散3.较易获得,价廉,最好已商品化4.组织中不应存在内源性酶或类似物质5.酶应稳定,标记后保持酶和抗体的活性缺点 酶与抗体共价结合损害部分抗体和酶的活性三步法(HRP labelled)多层反应法Alkaline Phosphatase - Anti-Alkaline Phosphatase (APAAP) Technique过氧化物酶抗过氧化物酶法(Peroxidase Antiperoxidase ,PAP法)• 原理与酶桥法相似• 制备PAP复合物: 使抗HRP抗体与HRP
进行杂合反应时所使用的探针若为放射性物质所标定者，杂合讯息可经由放射显影术 （autoradiography） 侦测出来；若为DIG所标定者，则需借助anti-DIG抗体与碱性去磷酸酶 （alkaline phosphatase, AP） 的conjugate,并利用碱性去磷酸酶的酵素活性转现杂合反应讯息。 目前常用来进行碱性去磷酸酶呈色反应的基质为NBT （nitroblue tetrazolium） 与BCIP （5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate
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