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非放射性荧光TRA P 法对端粒酶活性的检测与定量

一、细胞裂解的准备 (1)1×107 细胞重悬, 其来源可为新鲜样品或贮存于- 80℃ 1mo l 冰冻清洗缓冲液中 的无DM SO 的样品, 冰冻缓冲液包括10mM HEPES (pH7. 5), 1. 5mM M gCl2, 10mM KCl, 1mM 二硫苏糖醇(DTT ) , 然后离心(16 000rpm、4℃、1m in)。 (2)重悬细胞团于100ul 冰冻裂解缓冲液, 其包含10mM T ris-HCl (pH7. 5) , 1mM MgCl2, 1mM EGTA

拟南芥叶绿体蛋白质组学分析

8.0) 、5 mmol/L MgCl2、蛋白酶混合抑制剂（表 6-1)。 ( 4 ) 100% PF-Percoll：0.8 g PEG 8000、0.27 g Ficoll  400000，加 Percoll 至最终体积为 27.5 ml。 ( 5 ) Percoll 梯度：PF Percoll  ( 40% 或 85% ) 、0.5 mmol/L EDTA、50 mmol/L HEPES-KOH ( pH 8.0) 、330 mmol/L sorbitol。 ( 6 ) 浓缩

RNA介导的基因沉默

) 2.4 小干扰 RNA 检测 ( 1 )  用含有 0.5 mol/L 氯化钠的 10% 聚乙二醇 8000 [ 14 ] 沉淀大分子质量 RNA ( 见注4 ) ，回收上清中的小分子质量 RNA。 ( 2 ) 真空干燥 7 μg 小分子质量 RNA 碎片，干燥产物重悬于 10 μl 上样缓冲液（95% 甲酰胺、20 mmol/L EDTA  pH 8.0、0.05% 溴酚蓝、0.05% 二甲苯氰）。 ( 3 ) 将 RNA 样品在 95℃ 加热 5 min，冰上预冷后可上