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上海玉博生物科技有限公司
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文献和实验2. 次优样品分离。(A) 负载影响条带分辨率。 (B) 上样量过低会导致条带扭曲。 在上样缓冲液中准备好样品和分子量标准,其最终的体积通常占胶孔体积的 30%。由于孔底分布不均匀(图 2B),使用较少的上样体积会导致条带扭曲。对于含有 DNA 结合蛋白或粘性末端的样品,凝胶上样之前,混合物需加入至 含有 SDS 的上样染料中一同加热,因为蛋白质结合以及 DNA 片段之间的相互作用会导致分离效果不佳。 c .上样染料和缓冲液选择 制备凝胶电泳时,样品中添加了凝胶上样缓冲液 (通常是 6X 或 10
蛋白对检测的干扰,血清中有大约 55% 的蛋白为白蛋白,而 IgG 大约占血清中蛋白总量的 10-25%,这些高丰度蛋白的存在会增加低丰度蛋白检测的难度,去除占血清总蛋白近 75% 的白蛋白和 IgG 将有助于更好地鉴定其他的蛋白。G-Biosciences 的锚点™白蛋白去除试剂盒堪称白蛋白去除神器。血浆和脑脊髓液等样本中,包含大量的白蛋白,从而封闭掉在二维凝胶电泳中发现和鉴定其他低丰度蛋白的可能。AlbuminOUT™白蛋白去除试剂盒被设计用来在这种样本中大量去除白蛋白。 这种白蛋白
.6)。 ( 4 ) 10% 过硫酸铵(APS) 水溶液。 ( 5 ) 四甲基二乙胺(TEMED)。 ( 6 ) 去离子甲酰胺。 ( 7 ) 固定分子质量大小的寡核苷酸,作为分子质量标准或短距离 DNA 标尺,如 100 个碱基梯度标尺(NEB 公司)。 ( 8 ) 6X 溴酚蓝上样缓冲液:70% (m/V) 的蔗糖溶液中加 0.25% (m/V) 的溴酚蓝。 ( 9 ) 溴化乙锭溶液:5 mg/ml EB 水溶液。 2.5 片段纯化 2.5.1 哌啶切割后的直接纯化
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