NEB特约代理商|M0276L E. coli Poly(A

耐热DNA聚合酶常见的问题

的DNA，70°C温育5分钟，冰上冷却后，再加入20个单位的T4多聚核苷酸激酶，37°C温育30分钟。 怎样才能提高PCR产物平滑末端的连接效率? 载体应该去磷酸化以降低自身环化，插入片段的5"末端应具有磷酸基。其它提高连接效率的方法还有：降低ATP在连接反应缓冲液中的浓度，增加插入片段与载体的比例或使用快速连接试剂盒(NEB #M2200)。另外，可使用平端克隆试剂盒(NEB #E0103)。 VentR或Deep VentR DNA聚合酶产生平滑末端，可是我要

Synthesis of Double-Stranded Complementary DNA from Poly(A)+mRNA

-made primer for second strand synthesis, useful whether this is to be performed by more reverse transcriptase or by E. coli DNA polymerase 1 (pol 1). An idealized picture is shown in Fig. 1 . Before the double-stranded cDNA (ds cDNA) copy can be cloned

RNA聚合酶综述

(1.4,1.5,1.6,1.7,1.8,2,2.5,2.8,3,3.5,3.8,4,5,5.7,6)，其中对转录调控有关系的是基因2，其产物是E.coli聚合酶抑制剂。宿主的RNA聚合酶先受到基因0.7产物的磷酸化，再经抑制完全失去了作用，此时T7已不再需要I组的转录物了，因此废除了宿主RNA聚合酶的功能，而将自己编码的RNA聚合酶取而代之。第Ⅱ组的基因多与T7的复制酶系的合成及几种结构蛋白有关，但第Ⅱ组的启动子和复制的φL启动子因其保守顺序中分别有2～7个碱基发生了改变，所以是较弱的启动子，但由于其位置排在Ⅲ组启动子的前面，所以先进入宿主得以转录，而不与第Ⅲ组启动子的竞争