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四步致胜奇招 高效克隆你值得拥有（下篇）

，扩增目标片段 扩增片段与线性化载体、组装预混酶混合反应 转化感受态细胞 · Step 1 · 如果载体上正好有合适插入目标片段的酶切位点，酶切载体使之线性化。为了降低单酶切载体不完全的几率，减少载体自连和提高筛选成功率，强烈建议双酶切——后面一个切点只要距离第一个切点 5 个碱基以上就行（主要是给两个酶留出结合空间）。如果没有合适的酶切位点，根据选定插入位点设计引物，用反向 PCR 来获得线性化载体。在多片段组装克隆的世界里，凡是酶切搞不定的，统统 PCR 引物设计搞定。简单粗暴有效。 ·

Invitrogen RT-PCR 新工具

Invitrogen 性能卓越的系统整合了可以利用的最好的RT技术，包括SuperScript™ III RT和最新推出的Thermo-X™ RT。SuperScript™ III RT是M-MLV RT基因工程升级版本，减少了RNaseH活性，提供更高的热稳定性（1-3）。这种酶可以在高达55℃的情况下合成cDNA，比以前使用的反转录酶提供更高的特异性，更高的cDNA产量以及更多的全长产物。Thermo-X™ RT克隆自一种嗜热真细菌，提供高达70℃的热稳定

MACS（磁珠分选）技术相关产品（stem cell公司）

34+ 分选每毫升可标记2X109个细胞。RosetteSep® 免疫梯度离心分选，不需磁极，不需柱子 RosetteSep® 细胞负选产品 RosetteSep® 是一种快捷而简便的方法，可以从全血中直接富集高纯度靶细胞。利用StemCell公司专利的四聚体复合物(TAC)，将简单的密度梯度离心技术引入以特异性抗体为媒介的细胞富集系统。RosetteSep® 分离细胞的过程，仅仅包括室温下样品与单抗混合物的相互作用，以及标准的密度梯度离心。RosetteSep® 单抗混合物使非靶细胞与全血中的