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Protocol for intracytoplasmic staining of cytokines for FACS analysis
. 2) Stimulate cells for 2 hours in vitro with 50 ng/ml PMA (Sigma, P8139) + 500 ng/ml ionomicin (Sigma I0634) in phenol red free RPMI 1640 medium + 10% fetal calf serum at 37 deg C. 3) Add Brefeldin A (Sigma, B7651) to 10mg/ml for a further 2 hr
Metabolic labeling Immunoprecipitation
Materials •Complete medium: DMEM supplmented w/ 10% FCS, NEAA, Na-pyruvate, and Gln •Expre35 S35 S Protein labeling mix (NEN,#NEG-072), 7.9mCi/ml • Transfection reagents: CaCl2 , x2HBS, DNA •Labeling Medium: RPMI1640(Met,Cys-free; Sigma R-7513
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