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上海玉博生物科技有限公司
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文献和实验根据研究目的,研究者需要选择合适的载体。不同的载体对基因组DNA的长度有不同的要求,必须选择合适长度的基因组DNA来构建基因组文库。比如,对于黏粒载体,合适的片段长度大约为40kb;对于BAC载体,合适的片段长度平均为120kb-300kb。构建黏粒基因组DNA文库,需要将基因组DNA用注射器抽打来随机剪切DNA;接着用末端修复酶修复DNA,可以提高DNA连接入载体的效率;然后通过脉冲场电泳或者普通电泳来找到40kb左右的DNA片段,随后使用胶回收试剂盒回收DNA。构建BAC基因组DNA文库,需要
的pIndigoBAC-5、pCC1BACTM),平均来说,合适的片段长度为120kb-300kb。 构建黏粒基因组DNA文库,研究者需要将基因组DNA用注射器抽打来随机剪切DNA;接着用末端修复酶修复DNA,可以提高DNA连接入载体的效率;然后通过脉冲场电泳或者普通电泳来找到40kb左右的DNA片段,随后使用Epicentre GELase 胶回收试剂盒回收DNA。 构建BAC基因组DNA文库,研究者需要将基因组DNA用限制性内切酶(常用EcoR I、BamH I或者Hind III
片段,随后使用胶回收试剂盒回收DNA。 构建BAC基因组DNA文库,需要将基因组DNA用限制性内切酶(常用EcoR I、BamH I或者Hind III)来消化基因组DNA,然后通过脉冲场电泳找到合适长度的DNA片段(比如100kb-150kb),随后透析回收DNA。 需要注意: (1)电泳时,要选用合适的DNA Ladder,以保证电泳后可以准确定位所需分子量的DNA。 (2)电泳以后,应尽量缩短用紫外光照射目标DNA的时间,否则会显著降低克隆效率
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