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文献和实验有适合免疫沉淀IP的GST抗体吗? 近年来在原核表达体系中,谷胱甘肽S转移酶GST表达纯化系统的应用更为普遍,它的来源是日本血吸虫的25kDa大小的GST蛋白。GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便,以及利于GST抗体制备等特点和优势。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可从细菌裂解液中提取,在不变性的条件下通过亲和层析得到。GST融合蛋白可被位点特异性蛋白酶裂解,从而除去GST蛋白。正是由于以上的优点,商品化的GST融合蛋白表达体系以及GST标签抗体系统至今仍被广泛
蛋白等) 可以完成一般方法很难完成的分离,如变性和非变性蛋白、功能不同的蛋白的分离 属于一种吸附层析,载量高,具有高效的捕获和浓缩作用。 基本步骤 亲和层析作为一种吸附性层析,主要步骤包括平衡、上样、清洗、洗脱和再平衡步骤 (图10)。由于亲和作用需要在特定的条件下结合和洗脱,亲和层析需要使用特定的结合缓冲液和洗脱缓冲液。 图10 亲和层析的基本步骤 适用性 带有标签的融合蛋白纯化,如His标签蛋白、GST标签蛋白等。 抗体及抗体片段的纯化 其他和某些配基有特异性结合作用的分子的纯化
,只要互作蛋白间具有相互结合的结构域基础即可实验证明;Co-IP 实验是细胞内高表达目的蛋白,并通过 IgG 球珠-抗体-蛋白复合物体系,分离出互作的蛋白复合物,是细胞内的体内反应结合。2. GST pull-down 实验优点① 可验证蛋白质-蛋白质之间的直接互作。② GSH 谷胱甘肽偶联球珠亲和力强,洗脱纯度高。3. GST pull-down 实验缺点① 验证互作是在试管中进行的生化反应,不能够完全反应细胞内蛋白真实互作状态。② 融合表达的 GST 标签,肽链较长,可能会改变原目的蛋白的原有的折叠结构。
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