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文献和实验张锋团队再获新进展！Nature 发文解析「超迷你」核酸酶 IsrB 结构及 DNA 切割机制
Activity），这些核酸酶的体积约为 Cas9 大小的 30%，具有极大的改造潜力。 图片来源：Science 2022 年 10 月 12 日，张锋实验室继续在 Nature 期刊发表了题为 Structure of the OMEGA nickase IsrB in complex with ωRNA and target DNA 的研究论文，分析了脱硫弧菌 DtIsrB-ωRNA 和靶 DNA 的复合物的冷冻电镜结构（分辨率 3.1 Å）及 DNA 靶向切割的分子机制，为下一步对 IsrB
。一般地，基因特异的 sgRNA 模板序列为位于 PAM 序列（Protospacer Adjacent Motif）前间区序列邻近基序。这是一种见于 crRNA 分子的短核苷酸基序，可以被 Cas9 蛋白特异性识别并切割的 20 个 nt。 而 PAM 序列的特征为 NGG（其中 N 为任意核苷酸）01 找敲除目的基因的外显子根据目的基因选择待敲除靶基因位点找出敲除目的基因的外显子。 首先在第一个起始密码子 ATG 之后的外显子中找出特异性高的上下游序列。以小鼠基因 Th 为例。在 pubmed
, Cas9 mediates cleavage of target DNA upstream of PAM to create a DSB within the protospacer. ( b ) Design of chimeric sgRNA for genome cleavage. The SpCas9 nuclease ( yellow ) binds to genomic DNAdirected by the sgRNA consisting of a 20-nt guide
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