GIBCO特约代理商|31985070 OPTI MEM I

OPTI-MEM进行贴壁细胞培养的实验方法

分析? 各位前辈：我想把microRNA转到成纤维细胞内，用的是GIBCO(tm) Opti-MEM I Reduced-Serum Medium (1X)和Lipofectamine™ 2000转的。现在的问题是一加转染试剂细胞就大量死亡。Opti-MEM和冲洗用的PBS都37度预热过的。甚至我用无血清的DMEM对照也大量死亡。有时细胞死亡稍微好点，是不是和细胞批次关系更密切，还是有其他原因。 我的实验操作 ： 1 10%血清DMEM接种细胞在24孔板，长至30~50%满底

大神教你瞬时转染快，准，狠！

板液体每孔在 2ml 左右，不宜太多，或者太少。取两个 1.5mlEP 管，记为 A 管，B 管，每个 EP 管加入 250ul Opti-MEM I，然后 A 管加入 5-10ul lipofectamine 2000，B 管加入 100pM-200pM 的 siRNA（见买来的 siRNA 说明书），然后静置 5min，混合在一起，静置 20min，用 AB 混合液加入到 1.5ml 的无血清培养基 C 内，混匀； 将六孔板里的细胞的液体吸出，用 PBS 清洗两遍； 将 ABC 混合液 2ml

【资源】RNA干扰

方法。 脂质体型转染 一、注意事项 1. 转染试剂的用量 2. siRNA（小干扰RNA）的用量 3. 转染时的细胞密度 4. 转染时的操作顺序 5. 细胞与转染试剂 /siRNA（小干扰RNA）复合物的温浴的时间 二、转染步骤 选用生理状态良好的细胞对提高转染效率很重要. siRNA和脂质体的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。 1. 转染前一天， 将细胞接种在 6孔板上，24小时贴壁后细胞密度达到70%-90%； 2. 转染前，用基础培养基opti-MEM