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搞定 CRISPR/Cas9 系统操作

CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具，今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作，仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒，如下图所示： 酶切系统 37 ℃, 3 hr；Run 1% gel，回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端，以利于下游 oligo 退火产物的连接；酶切时请充分，且绝对不能加 CIP 处理

AAV 在神经科学研究中的应用策略

动物 Sst-IRES-Cre 小鼠，Shank3B KO小Shank3+/+:CaMKIIα-Cre 杂合小鼠，Shank3-/-:CaMKIIα-Cre 杂合小鼠，10 周龄   主要实验结果 1.将病毒注射到 CaMKIIα-Cre 小鼠中，可以稀疏标记多个大脑区域的投射神经元（图 18A-C）。 2.对 Shank3 KO 小鼠的投射神经元形态进行了分析，发现与同窝对照小鼠相比，Shank3 KO 小鼠在纹状体、皮层和海马体中的 投射神经元表现出不同的树突复杂性和树突棘变化(图 18D-L

Quantitative PCR

µg/ml; yeast genomic DNA, 1 µg/ml; bacterial genomic DNA, 0.1 µg/ml; and plasmid DNA, 1-5 ng/ml. Radiolabeled Compounds [α-32]dCTP (sp. act. 3000 Ci/mmole at 10 mCi/ml) Gels/Loading Buffers 　　Polyacrylamide or agarose gelAdditional Items 　Barrier