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上海玉博生物科技有限公司
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文献和实验相关专题 成功走出第一步:DNA提取 实验目的: 1.熟悉分子 生物学实验的操作特点。 2.掌握人类基因组DNA提取 的基本原理。 3.熟悉人类基因组 DNA提取的基本方法。 4.熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理和操作。 实验原理: 用细胞裂解液裂解细胞膜,收集细胞核,加入SDS破裂核膜,用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA上解离下来,经苯酚﹑氯
值出现过晚(Ct>38)扩增效率低: 反应条件不够优化。设计更好的引物或探针;改用三步法进行反应;适当降低退火温度;增加镁离子浓度等。PCR各种反应成分的降解或加样量的不足。PCR产物太长: 一般采用80-150bp的产物长度。3. 标准曲线线性关系不佳加样存在误差: 使得标准品不呈梯度。标准品出现降解: 应避免标准品反复冻融,或重新制备并稀释标准品。引物或探针不佳: 重新设计更好的引物和探针。模板中存在抑制物,或模板浓度过高4. 负对照有信号引物设计不够优化:应避免引物二聚体和发夹结构的出现。引物
、 实验流程 1、 总DNA提取 使用DNA提取试剂盒提取植物基因组DNA,通过紫外分光光度计检测或用标准品跑胶检测。一般来说,100ng的基因组DNA作为反应模板是足够的。 2、 EcoR1酶消化(20ul体系/样品) 3、Mse1酶消化(20ul体系/样品) 5、 预扩增(20ul体系/样品) sample 4ul Primer
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