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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
上海一研
- 检测范围：
0
- 检测方法：
ELISA Kit
- 应用：
10
- 适应物种：
详见说明书
- 标记物：
详见说明书
- 样本：
Anti-soy protein-IgGa2 antibody
- 规格：
48T/96T
我们可以根据您的应用需要，比如在检测范围、种属以及灵敏度等方面有特殊要求，而量身定制检测试剂盒，有效控制检测试剂成本。并可提供免费代测。
如果您在使用ELISA试剂盒产品时有任何的疑问，或者对我们有任何意见建议，您都可以通过来电或QQ咨询，我们的销售/技术工程师7×24h为您服务。
二、ELISA检测概述
ELISA（酶联接免疫吸附反应分析）是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。
技术流程:
双抗体夹心法(检测未知抗原):
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。
2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法(检测未知抗体):
1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。
2、加样：加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照) 3、加酶标抗体：于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。
4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
客户须知
1、液体类标本（细胞培养上清、组织匀浆、血清、血浆、尿液、胸水、腹水、脑脊液等）；
2、样本保存：请尽早检测，2-8℃保存一天；需更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存。如需周期收集样本，请将样本及时分装标号后，置-20℃或-70℃保存；
3、请提前告诉我们：您样本的种属、样本数量、待测指标及其他特殊要求。
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文献和实验产生假阳性反应。一般说来，在 3 天内测定的血清标本可放置于 4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。 2. 试剂的准备 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。 ELISA 中用的蒸馏水或去离子
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（ALIX）、肿瘤易感基因 101 蛋白（TSG101）、热休克蛋白（HSP70、HSP90），以及细胞分泌的特异性蛋白。其中 CD9、CD63、HSP70、TSG101 是外泌体常用的鉴定蛋白。 流式细胞术检测：外泌体可以先进行荧光标记，再通过流式细胞仪检测外泌体表面标记蛋白。但是传统的流式细胞仪检测样本的颗粒大小是 300-500 nm，而外泌体直接都在 300 nm 以下，因此，可能大量的外泌体检测不到，造成分析不太准确。 ELISA 检测 ：根据外泌体的表面标志物，如 CD9、CD63 进行
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