- ￥4490
- 沪震生物
- HZ95-29060
- 中国
- 2025年12月19日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
88
- 英文名：
Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(HP-PRRSV)
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(HP-PRRSV) RT-PCR Kit
产品及特点
高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株(Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(HP-PRRSV))会引起非洲猪瘟等急性、出血性、烈性传染病，其特征是发病过程短，最急性和急性感染死亡率高达100%，临床表现为发热(达40~42℃），心跳加快，呼吸困难，部分咳嗽，眼、鼻有浆液性或粘液性脓性分泌物，皮肤发绀，淋巴结、肾、胃肠粘膜明显出血，非洲猪瘟临床症状与猪瘟症状相似，只能依靠实验室监测确诊，对养猪业造成严重损害，因此快速检测高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术，本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株的试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化，灵敏性高。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株高度保守区设计，不会跟其他病毒的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
本产品只能用于科研。
规格及成分
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 2×Probe qPCR MagicMix | 0.5 mL（本色盖） |
| 试剂二 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 试剂三 | 高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株PCR引物 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 | 高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株qPCR探针 | 100 μL（棕色管） |
| 试剂五 | 高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株阳性对照2.0 (1×10E8拷贝/μL) |
50 μL（红盖） |
| 试剂六 | 核酸释释剂试用装 | 50次（2.5mL） |
| 使用手册 | 1 份 |
自备试剂：样品DNA。
使用方法 一、稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3.在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
7.如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。
三、Probe qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
9.如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。
10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
| 成份 | N+2 个 样品管 |
PCR 阴性 对照管 |
标准曲线 样品管（2-7管） |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 10μL | 10μL | 各10μL |
| 高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株qPCR探针 | 2μL | 2μL | 各2μL |
| 高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株 PCR引物混合液 |
2μL | 2μL | 各2μL |
| 待测样品DNA模板 | 6μL | 不加 | 不加 |
| 第7步所得标准曲线样品稀释液（2-7号） | 不加 | 不加 | 各6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…） |
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min |
| PCR 反应 （40 个循环） |
94℃ | 0.5 min |
| 55℃ | 0.5 min（采集FAM通道的荧光信号） | |
| 72℃ | 0.5 min | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
12.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
13.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验在 1 个小时内就可得出是否感染禽流感病毒的初步结论，从而为疫情的控制和相关应急措施的实施赢得极其宝贵的时间。 目前世界上已有的流感快速诊断试剂盒仅能鉴别出型，即有型的特异性，但无法鉴别出亚型，对于型内高致病性、低致病性和无致病性亚型却缺乏基本的识别能力。采用传统病原学检测方法 —— 鸡胚病毒培养法检测禽流感病毒需要数天时间，琼脂凝胶免疫扩散试验 (AGID) 需要 3 ～ 5 天，最快的 RT － PCR 也需要 4 小时以上，检测时间过长。 以 RT － PCR 法检测需要
或欧洲鸡瘟。按病原体类型的不同，禽流感可分为高致病性、低致病性和非致病性禽流感三大类。非致病性禽流感不会引起明显症状，仅使染病的禽鸟体内产生病毒抗体。低致病性禽流感可使禽类出现轻度呼吸道症状，食量减少，产蛋量下降，出现零星死亡。高致病性禽流感最为严重，发病率和死亡率均高，感染的鸡群常常“全军覆没”。 目录 • 基本概念 • 疫情 • 疫苗研究 • 药物研究 基本
病、军团杆菌、登革热病毒和骨质疏松标志物等等项目。 3． 国际市场中的检测项目多样化，且规格多样化人性化 如Determine的 HIV试剂针对了高度变异的O群；Cholestech LDX系列的基于干化学方法的脂类标志物，其检测卡有TC.HDL.GLU、TC.GLU多种组合，Triage的呼吸短促盘，联合快速诊断肌酸激酶、肌红蛋白；这些多样化、人性化的组合，使得全面、快速、准确的诊断得以实现。
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