库皮科斯病毒RT-LAMP试剂盒

库皮科斯病毒RT-LAMP试剂盒产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。

抗体
H1N1++H3N2 nucleocapsid protein    A型流感病毒核衣壳蛋白抗体
H1N1+H5N1+H3N2 nucleocapsid protein    A型流感病毒核衣壳蛋白抗体
H1N1+H5N1+H3N2 nucleocapsid protein    A型流感病毒核衣壳蛋白抗体
Haemophilus influenza B    B型流感病毒蛋白抗体
HPV16-E7    人类乳头状瘤病毒16-E7抗体
Hepsin    跨膜蛋白酶丝氨酸1抗体
HLC3    肺癌癌基因蛋白3抗体
High density lipoprotein    高密度脂蛋白抗体
HEF1    蛋白激酶底物相关蛋白抗体
HIV1 p55+p24+p17    艾滋病病毒抗体
H3N2 hemagglutinin    流感病毒H3N2血凝素抗体
HPV16 L2    人乳头瘤病毒16型L2抗体
H7N9 Matrix Protein 1    A型禽流感病毒H7N9 M1蛋白抗体
Hirudin    水蛭素抗体
HuC    副肿瘤综合症小脑变性相关蛋白抗体
Hsp93    植物热休克蛋白93抗体
rHPV    重组人乳头瘤病毒抗体
HADHA    长链烯脂酰辅酶A脱氢酶抗体
HADHB    羟辅酶A脱氢酶β抗体
HMGCL    三羟基三甲基辅酶A裂解酶抗体
HDL    高密度脂蛋白抗体
phospho-HMGCR(Ser872)    磷酸化三羟基三甲基辅酶A还原酶抗体
HSD3a    羟基类固醇脱氢酶3α抗体
HLX1    同源异型盒基因HLX1蛋白抗体
HMGCS1    三羟基三甲基辅酶A合成酶1
HSF1    热休克因子1抗体
phospho-HSF1(Ser326)    磷酸化热休克因子1抗体
Hsc70    热休克蛋白71抗体
hHBrk1    微丝相关蛋白hHBrk1抗体
HPCL2    植烷酰辅酶A羟化酶2抗体
H9N1 Neuraminidase    A型流感病毒H9N1神经氨酸酶型抗体
H9N1 Hemagglutinin    A型流感病毒H9N1血凝素型抗体
HPV33 E7    人类乳头状瘤病毒33抗体产品特点：
1. 使用化学修饰的热启动聚合酶，反应特异性高，*程度地避免了非特异扩增；
2. 反应缓冲液经充分优化，反应灵敏快速，40个循环只需20多分钟；
3. 抗干扰能力强，反应重复性高，适合对土壤、粪便、肿瘤和血液来源的复杂样本中的靶基因进行检测分析。 在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
 特异性荧光标记：
 TaqMan法
 TaqMan探针的特性：
（1）5′端标记有报告基团（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端标记有荧光淬灭基团 （Quencher, Q）
（3）探针完整，R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ，无荧光， R与Q分开，发荧光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探针 相对定量通过内标定量：
内标（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在细胞中的表达量或在基因组中定，受环境因素影响小，内标定量结果代表了样本中所含细胞或基因组数量。
库皮科斯病毒RT-LAMP试剂盒检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表： 试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量 荧光PCR反应液 14µL N×14µL 酶混合物 1 µL N×1 µL 总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

实验方法步骤：
方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。      10×PCR buffer 
                  5 μl     dNTP mix （2mM）   
          4 μl     引物1（10pM） 
                2 μl     引物2（10pM） 
                2 μl     Taq酶 （2U/μl）
                1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
   1 μl      加ddH2O至 50 μl 
  视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR实验步骤
典型的PCR由（1）高温变性模板；（2）引物与模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。