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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温冷藏
- 保质期:
详见说明书
- 库存:
100
- 供应商:
上海莼试
- 规格:
50T
需要自备的器材:
1.仪器:分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器(2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯(DEPC)水 处理的灭菌离心管、吸头(10 µL、200 µL、1000 µL)、灭菌双蒸水。
钙激活氯离子通道4蛋白抗体
嗜酸粒细胞趋化蛋白3抗体
C-C元件趋化因子26抗体
趋化素抗体
补体C2a链多肽抗体
着丝粒蛋白C1抗体
16号染色体开放阅读框72抗体
补体C4 γ 链蛋白抗体
补体C4d-A蛋白抗体
补体C4b-A蛋白抗体
阳离子通道精子相关蛋白2抗体
阳离子通道精子相关蛋白3抗体
阳离子通道精子相关蛋白4抗体
电压依赖型N型钙通道α1B抗体
CP2相关转录抑制因子1抗体
L选择素抗体
阳离子通道精子相关蛋白β亚基抗体
睾丸特异性蛋白57抗体
防御素α5抗体
三磷酸腺苷依赖解旋酶DDX23抗体
多能发育相关基因5抗体
三磷酸腺苷依赖解旋酶DDX3抗体
磷酸化三磷酸腺苷依赖解旋酶DDX3抗体
RNA结合泛素连接酶DZIP3抗体
生殖细胞发育相关蛋白DAZL抗体
精子发育相关蛋白DDX3Y抗体
DNA聚合酶γ抗体
锌指结构蛋白酶20抗体
双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶DYRK2抗体
牙本质基质蛋白1抗体
锌离子结合蛋白DTX2抗体
形态发生紊乱关联激活因子2抗体
细胞质分裂付出蛋白2抗体
细胞质分裂付出蛋白5抗体
转基因品系大豆GU262 PCR试剂盒二氢二醇脱氢酶1/2抗体
衰变加速因子蛋白16抗体
迪格弗-梅尔基奥尔-克劳森综合征相关蛋白抗体
双氧化酶激活因子2抗体
DNA交联修复蛋白1C抗体
磷酸化凋亡相关蛋白激酶1抗体
核仁蛋白NAP57抗体
DLST蛋白抗体
桥粒斑蛋白1+2抗体
磷酸化凋亡相关蛋白激酶2抗体
凋亡相关蛋白激酶样蛋白1抗体
B淋巴细胞衔接分子DAPP1抗体
磷酸化B淋巴细胞衔接分子DAPP1抗体
磷酸化Fas相关死亡结构域蛋白抗体
冷休克蛋白DBPA抗体
脱帽酶1A抗体
清道夫脱帽酶/热休克蛋白1抗体
干扰素调节因子4结合蛋白抗体
DNA酶1样蛋白1抗体
抗菌蛋白DCD抗体
肌动蛋白解聚因子抗体
甘油二酯酰基转移酶2抗体
DHX15蛋白抗体
DIAPH2蛋白抗体
磷酸化蓬乱蛋白2抗体
Wnt通路抑制因子2抗体
诱捕受体2抗体
DNA甲基转移酶相关蛋白1抗体
减数分裂同源蛋白DMC1抗体
DNA连接酶3抗体
磷酸化DNA依赖性蛋白激酶抗体
DNA聚合酶δ2/DNA pol δ 2抗体
DNA聚合酶δ催化亚单位/DNA pol δ cat抗体
DNA聚合酶η抗体
DNA聚合酶γ/DNA pol γ抗体
DNA聚合酶ι/DNA pol ι抗体
特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单,定量准确快速。
2. 引物经过优化,特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照,便于分析试验结果。
储存条件:
14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
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请教real time PCR的RT部分能否使用传统半定量RT-PCR试剂盒的反转录部分?
各位老师: 您们好!偶欲做几个基因的RT-PCR实验。偶先用传统的半定量两步法RT-PCR试剂盒(TaKaRa DRR019A)扩增了几个基因,并用该试剂盒反转录了不少cDNA。但还有2个基因偶打算用real time PCR法来扩增。拟采用TaKaRa DRR041S试剂盒。但是TaKaRa DRR041S试剂盒说明书上写的反转录步骤是使用另外一个单独的RT Reagents (TaKaRa DRR033A),得到cDNA再用TaKaRa DRR041S试剂盒扩增。但是仅一个RT
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