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- 2025年07月15日
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- 保存条件：
低温冷藏
- 保质期：
详见说明书
- 库存：
100
- 供应商：
上海莼试
- 规格：
50T
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。
其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
操作步骤 :
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
DNA聚合酶κ/DNA pol κ抗体
DNA聚合酶λ/DNA pol λ抗体
DNA聚合酶μ/DNA pol μ抗体
细胞周期蛋白3抗体
DNAJC9蛋白抗体
DNA甲基转移酶2抗体
DNA甲基转移酶3L抗体
二肽基肽酶10抗体
二肽氨基肽酶3抗体
DNA复制相关元件结合因子抗体
B淋巴细胞转录调节相关蛋白DRIL1抗体
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核糖核酸酶3/Drosha抗体
脱氧胸苷酸激酶DTYMK抗体
双特异性蛋白磷酸酶10抗体
双特异性蛋白磷酸酶5抗体
磷酸化酶动力蛋白1抗体
酶动力蛋白1抗体
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DNA损伤结合蛋白1抗体
防御素α4抗体
转录因子DP1抗体
脑发育同源蛋白2抗体
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畸形表皮自调节因子1抗体
脱碘酶2抗体
DNA依赖性蛋白激酶抗体
细胞膜蛋白Derlin抗体
二脂酰甘油酰基转移酶抗体
D型受体抗体
DSCC1蛋白抗体
动力蛋白激活蛋白6抗体
动力蛋白激活蛋白亚基3抗体
大脑发育同源蛋白2抗体
脑发育同源蛋白1抗体
线粒体2,4-双烯酰辅酶A还原酶1抗体
Dab2相互作用蛋白抗体
信号转导功能磷蛋白DAB2抗体
细胞命运决定因子DACH1抗体
热休克蛋白家族40抗体
GTP发育调控结合蛋白1抗体
细胞骨架4.1蛋白家族DAL1抗体
跨膜蛋白16A/钙激活氯离子通道抗体
退行性精母细胞同源物1抗体
7脱氢胆固醇还原酶抗体
DAP凋亡诱导蛋白激酶2抗体
钾通道蛋白DRK1抗体
肌萎缩相关蛋白DAG1抗体
磷酸化肌萎缩相关蛋白DAG1抗体
DENN域内含蛋白2D抗体
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。 3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
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1．LAMP引物的设计LAMP引物的设计主要是针对靶基因的六个不同的区域，基于靶基因3' 端的F3c、F2c和Flc区以及5' 端的Bl、B2和B3区等6个不同的位点设计4种引物。FIP(Forward Inner Primer)：上游内部引物，由F2区和F1C区域组成，F2区与靶基因3’端的F2c区域互补，F1C区与靶基因5' 端的Flc区域序列相同。F3引物：上游外部引物(Forward Outer Primer)，由F3区组成，并与靶基因的F3c区域互补。BIP引物：下游内部引物
组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注，短短几年，该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，在这次甲型H1N1流感事件中，日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。通过荣研公司近十年的推广，LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中，并得到了欧美国家的认同。LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，结果的检测也很简单，不需要像PCR
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