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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
SPLIT RNA Extraction Kit
- 保质期:
11个月
- 供应商:
仲黎商贸
- 保存条件:
常温
- 规格:
48反应
- 可提取从 17 nt 到大于10,000 nt Total RNA;
- 可以选择性的提取大片段或者小片段的RNA (Cut-off值在 150 nt 左右);
- 仅需要30分钟;
- 很高的RNA完整性和纯度(组织: RIN>8, 细胞培养物: RIN 10);
- 试验过程无需 DNase处 理,且保证RNA 中无基因组DNA;
- 完美的提取效率(低投入量 ,低至0.5mg 组织或 100个细胞);
- 本试剂盒可用千FFPE样本(样本需经过脱蜡处理) ;
- NEW! SPLIT for blood试剂盒可去除人血液样本 中的Globin mRNAs
SPLIT RNA提取试剂盒可以简单、快捷、可靠地从不同物种(如哺乳动物、植物、昆虫、真菌和细菌)的多种材料(血浆、组织、细胞系)中提取RNA。样品在高盐提取缓冲液下匀浆,既可使RNase失活,又能提高样品的裂解。用酸性的酚-氯仿法抽提RNA,并辅以锁相凝胶管(phase-lock gel tubes),将含RNA的水相与有机相(含DNA和蛋白质)清晰的分离开来。紧接着将RNA组分用硅胶柱纯化回收,既可回收总RNA,也可回收大片段或/和小片段RNA。
用SPLIT RNA提取试剂盒提取的样本适用于所有类型的RNA测序,从miRNAs到长度大于10,000 nt的mRNAs。提取出的RNA样本不含基因组DNA污染,无需经过DNase、热失活或gDNA清除柱等处
理,避免RNA降解或片段大小的偏差 (Fig. 2)。
Figure 2 | SPLIT提取出的RNA无基因组DNA污染。 (A) 从小鼠肝脏提取的RNA在甲醛变性琼脂糖凝胶上的电泳结果。TRIzol法提取
的对照样本基因组DNA污染明显,而SPLIT试剂盒提取的RNA中无基因组DNA污染。(B) 使用不同的基因组DNA清除方法去除基因组
DNA后,用Agilent's TapeStation评估RNA的完整性(200 - 10,000 nt)— SPLIT在RNA完整性和大小无偏差分布方面,比其它方法有更好的表现。
通过使用small RNA markers进行验证,SPLIT RNA提取试剂盒可以从总RNA或small RNA组分中有效回收低至17 nt片段大小的siRNA和miRNA(Fig. 3)。
Figure 3 | 在总RNA或small RNA洗脱过程中,miRNA和siRNA RNA均可以被有效地回收。使用SPLIT试剂盒从小鼠肝脏组织中提取RNA,在组织中混入单链miRNA和双链siRNA markers。提取的产物经变性凝胶电泳。第1和第5泳道分别是理论上最大的miRNA和双链siRNA markers 回收量,可进行半定量比较分析。
SPLIT血液RNA专用提取试剂盒
SPLIT血液RNA专用提取试剂盒操作流程中,在样品均质化之前先进行红细胞裂解,此举保证从新鲜的人血中提取完整性高的RNA(Fig.4)。而且在不急于提取RNA的情况下,可在红细胞裂解后将样品重悬于抽提缓冲液中,于-80°C下保存长达三个月。
Figure 4 | SPLIT血液RNA专用提取试剂盒可提高RNA质量。安捷伦2100的检测结果,SPLIT血液 RNA提取试剂盒(绿色,RIN 8.7)、无红细胞裂解的常规SPLIT提取方法(蓝色,RIN 7.0)。
有效去除人血液中Globin mRNA
增加的红细胞裂解操作,能有效的去除人血中globin mRNA(Fig.5)。
Figure 5 | SPLIT血液RNA试剂盒可以去除> 95%的Globin mRNA。分别用SPLIT和SPLIT 血液RNA专用提取试剂盒从新鲜人血中提取RNA。 用QuantSeq 3'mRNA试剂盒制备RNA文库,测序结果与人类参考基因组进行比对,比对到globin mRNAs的reads百分数如图所示。
Globin mRNA去除提高基因检出率
Figure 6 | 使用SPLIT血液RNA专用提取试剂盒提高了基因检出率。分别用SPLIT RNA提取试剂盒(蓝色)和SPLIT血液 RNA提取试剂盒(绿色)进行RNA提取,随后用QuantSeq 3'mRNA(FWD)试剂盒进行文库构建。 A)基因检出图。根据CPM(每百万读数的计数)均一化reads数(阈值> 0.5 CPM)计算检出的基因数。B)分别用SPLIT和SPLIT血液RNA专用提取试剂盒提取样本并制备文库,用两种文库检测到的基因数目以及重叠情况绘制韦恩图。
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文献和实验Fast and reliable mini-prep RNA extraction from Neurospora crassa
We have developed a method for isolating high quality total RNA from N. crassa mycelia that reliably yields large quantities. It is possible to extract more than 50 minipreps at once. Procedures of RNA extraction published so far follow
RNA extraction is a routine technique in a molecular biology lab. High quality of RNA extracted from plants is a prerequisite to succeeding in subsequent experiments such as reverse transcription-polymerase chain reaction, Northern
of uncharacterized species, and many other applications(未知物种的转录组组装和其他应用). 关于Lexogen,产品更多专注于短读长RNA测序工作流程(当然也有可用于长读长测序的全长cDNA扩增试剂盒)。试验程序的一般大纲如下: 从样本中分离出RNA,并除去污染的DNA,例如,用DNase处理。 如果需要,则对RNA进行预处理,即通过polyA选择或rRNA去除来富集mRNA。 RNA片段化(如果使用无片段化建库流程










