Lexogen SPLIT RNA Extraction

产品优势

工作流程
SPLIT RNA提取试剂盒可以简单、快捷、可靠地从不同物种（如哺乳动物、植物、昆虫、真菌和细菌）的多种材料（血浆、组织、细胞系）中提取RNA。样品在高盐提取缓冲液下匀浆，既可使RNase失活，又能提高样品的裂解。用酸性的酚-氯仿法抽提RNA，并辅以锁相凝胶管(phase-lock gel tubes)，将含RNA的水相与有机相（含DNA和蛋白质）清晰的分离开来。紧接着将RNA组分用硅胶柱纯化回收，既可回收总RNA，也可回收大片段或/和小片段RNA。
性能表现
用SPLIT RNA提取试剂盒提取的样本适用于所有类型的RNA测序，从miRNAs到长度大于10,000 nt的mRNAs。提取出的RNA样本不含基因组DNA污染，无需经过DNase、热失活或gDNA清除柱等处
理，避免RNA降解或片段大小的偏差 (Fig. 2)。

Figure 2 | SPLIT提取出的RNA无基因组DNA污染。 (A) 从小鼠肝脏提取的RNA在甲醛变性琼脂糖凝胶上的电泳结果。TRIzol法提取
的对照样本基因组DNA污染明显，而SPLIT试剂盒提取的RNA中无基因组DNA污染。(B) 使用不同的基因组DNA清除方法去除基因组
DNA后，用Agilent's TapeStation评估RNA的完整性(200 - 10,000 nt)— SPLIT在RNA完整性和大小无偏差分布方面，比其它方法有更好的表现。
通过使用small RNA markers进行验证，SPLIT RNA提取试剂盒可以从总RNA或small RNA组分中有效回收低至17 nt片段大小的siRNA和miRNA(Fig. 3)。

Figure 3 | 在总RNA或small RNA洗脱过程中，miRNA和siRNA RNA均可以被有效地回收。使用SPLIT试剂盒从小鼠肝脏组织中提取RNA，在组织中混入单链miRNA和双链siRNA markers。提取的产物经变性凝胶电泳。第1和第5泳道分别是理论上最大的miRNA和双链siRNA markers 回收量，可进行半定量比较分析。
SPLIT血液RNA专用提取试剂盒
SPLIT血液RNA专用提取试剂盒操作流程中，在样品均质化之前先进行红细胞裂解，此举保证从新鲜的人血中提取完整性高的RNA（Fig.4）。而且在不急于提取RNA的情况下，可在红细胞裂解后将样品重悬于抽提缓冲液中，于-80°C下保存长达三个月。

Figure 4 | SPLIT血液RNA专用提取试剂盒可提高RNA质量。安捷伦2100的检测结果，SPLIT血液 RNA提取试剂盒（绿色，RIN 8.7）、无红细胞裂解的常规SPLIT提取方法（蓝色，RIN 7.0）。
有效去除人血液中Globin mRNA
增加的红细胞裂解操作，能有效的去除人血中globin mRNA(Fig.5）。

Figure 5 | SPLIT血液RNA试剂盒可以去除> 95％的Globin mRNA。分别用SPLIT和SPLIT 血液RNA专用提取试剂盒从新鲜人血中提取RNA。 用QuantSeq 3'mRNA试剂盒制备RNA文库，测序结果与人类参考基因组进行比对，比对到globin mRNAs的reads百分数如图所示。
Globin mRNA去除提高基因检出率

Figure 6 | 使用SPLIT血液RNA专用提取试剂盒提高了基因检出率。分别用SPLIT RNA提取试剂盒（蓝色）和SPLIT血液 RNA提取试剂盒（绿色）进行RNA提取，随后用QuantSeq 3'mRNA（FWD）试剂盒进行文库构建。 A）基因检出图。根据CPM（每百万读数的计数）均一化reads数（阈值> 0.5 CPM）计算检出的基因数。B）分别用SPLIT和SPLIT血液RNA专用提取试剂盒提取样本并制备文库，用两种文库检测到的基因数目以及重叠情况绘制韦恩图。
订购信息
订购货号   产品名称                                                                     试剂盒规格