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- 上海一研
- 5ng/mL~160ng/mL
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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
上海一研
- 检测范围：
5ng/mL~160ng/mL
- 检测方法：
ELISA
- 适应物种：
人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、鸡、虾、鱼等。
- 标记物：
1
- 样本：
Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase
- 规格：
48T/96T
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人1-磷酸鞘氨醇（S1P）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人1-磷酸鞘氨醇（S1P）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求:
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂和器材:
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水
注意事项:
1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6.在储存和温育时避免强光直接照射。
7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9.不能使用过期产品。
10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
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文献和实验书太大了，上传不了，需要的话我可以发到邮箱或者各位在网上载，assaydesigns公司网页就有。 licanming 怎么无人回啊？只好自己顶一下！ zhidanguilai 检测PKC活性可以用加拿大Immunechem公司的非放射性蛋白激酶C活性分析试剂盒，安全、快速、稳定，可用于筛选蛋白激酶C抑制剂或激活剂、定性定量分析纯化或部分纯化的PKC激酶活性。 测试盒原理： 基于ELISA的基本
为广泛存在于真核细胞中的 Ca2 受体蛋白质（参见钙结合蛋白）。分子量 1.7万，具有与肌肉的肌钙蛋白 C相似的氨基酸顺序，对热稳定，等电点为 4.0， 1分子可与 4分子的 Ca2 结合，其解离常数约为 10-6 M。曾被发现作为环腺苷磷酸二酯酶的活化蛋白（垣内史朗等， 1970）。后来发现腺苷酸环化酶、磷酸化酶 b激酶、红细胞膜 Ca2 、 Mg2 － ATP酶、 NAD激酶、肌球蛋白 L链激酶等酶，都可在 Ca2 的存在下被其活化。关于活化的机制，认为
水平 mengcb 还可以用PKC的 报告质粒检测FRET变化啊，也很经典的 bianbenjamin 放射性受体配体结合试验也是一个非常灵敏的测定PKC转位的方法，只是需要同位素标记的佛波酯，还是买的到的。我有这样一篇文献，需要的话上传给你。不过还是没有解决你的问题，你问的的确很深了，我也非常感兴趣这个问题，期待高人回答。 zhidanguilai 加拿大Immunechem公司的非放射性蛋白激酶C活性分析试剂盒
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