小鼠皮下结缔组织细胞；L Wnt-3A

细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 

 
订购信息：
 

产品名称	小鼠皮下结缔组织细胞；L Wnt-3A
生长特性	贴壁生长
货号	XG-X 17252

细胞名称    小鼠皮下结缔组织细胞；L Wnt-3A
形态特性  成纤维细胞
生长特性 贴壁生长
特征特性  L-M(TK-) cells (ATCC CCL-1.3) 用Wnt-3A表达载体转染并在含G418的培养基中筛选稳转株。 Wnt-3A基因编码一个有变异的信号功效分泌性糖蛋白。 Wnt基因控制胚胎发过程中的许多模式形成和生长事件。 这些细胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白。 它们是目前Wnt-3A条件培养基的最好来源。 由于这种条件培养基还包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，对于涉及Wnt-3A条件培养基的实验有必要用其来源细胞株(ATCC CRL-2648)作对照。
培养条件  DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  优质胎牛血清，10%；0.4 mg/ml G-418
传代方法  消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况 PN5
冻存条件  完全培养基+8%DMSO
支原体检测 阴性　
STR
同工酶     
染色体      　
使用权限     A类
细胞的种类：
产品仅用于科研第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞处理：
1）复苏细胞产品名称：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM，常温条件下离心5分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，吹打均匀后，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。冻存培养基
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优化，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
格列喹酮 HPLC≥98% 20mg ELISAKiAG-1人重组激活基因1规格：48T/96T
格列齐特 HPLC≥98% 20mg ELISAKiAG-2人重组激活基因2规格：48T/96T
葛根素 HPLC≥98% 20mg ELISAKiAGE/AGER人晚期糖基化终末产物受体规格：48T/96T
葛根素″O木糖苷 HPLC≥98% 20mg ELISAKiANKL兔核因子κB受体活化因子配基规格：48T/96T
葛根素芹菜糖苷 HPLC≥98% 20mg ELISAKiBP-4人视黄醇结合蛋白4规格：48T/96T
根皮苷 HPLC≥98% 20mg ELISAKiBP人视黄醇结合蛋白规格：48T/96T
根皮素 HPLC≥98% 20mg ELISAKienin人肾素规格：48T/96T
根薯酮内酯A HPLC≥98% 20mg ELISAKiLN人松弛肽/松弛素规格：48T/96T
根薯酮内酯B HPLC≥98% 20mg ELISAKiLR人视黄酸诱导基因/RIG-1样受体规格：48T/96T
钩藤碱 HPLC≥98% 20mg ELISAKit6-keto-PGF1a兔6同前列腺素F1a规格：48T/96T
小鼠巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5)ELISA试剂盒     Empagliflozin  中文名：依帕列净  分子式：C23H27ClO7 
小鼠巨噬细胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA试剂盒     Empagliflozin  864070-44-0  中文名：依帕列净  分子式：C23H27ClO7  度：95.0%   
小鼠巨噬细胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISAKit     Clopidogrel bisulfate  135046-48-9  中文名：硫酸氢氯吡格雷  分子式：C16H18ClNO6S2 
小鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA试剂盒              Empagliflozin  864070-44-0  中文名：依帕列净  分子式：C23H27ClO7 
小鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISAKit     Emodin  中文名：大黄素  分子式：C15H10O5  度：99.0%
Dibucaine hydrochloride  1961/12/1   中文名：盐酸地布卡因  分子式：C20H30ClN3O2  度：98.0%  关键词：    小鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISAKit  
Diaveridine  5355-16-8  中文名：敌菌净  分子式：C13H16N4O2  度：98.0%      小鼠C肽(C-Peptide)ELISAKit              
Dexmedetomidine hydrochloride  145108-58-3  中文名：盐酸右美托咪定  分子式：C13H17ClN2  度：98.0%      小鼠热休克蛋白糖蛋白elisa试剂盒   小鼠热休克蛋白糖蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠热休克蛋白糖蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠热休克蛋白糖蛋白试剂盒、小鼠热休克蛋白糖蛋白eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
Dexamethasone-17-acetate  1177-87-3  中文名：醋酸地塞米松  分子式：C24H31FO6  度：98.0%  关键词：    小鼠乳酸脱氢酶elisa试剂盒   小鼠乳酸脱氢酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠乳酸脱氢酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠乳酸脱氢酶试剂盒、小鼠乳酸脱氢酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
Dexamethasone 21-phosphate di salt  2392-39-4  中文名：地塞米松磷酸钠  分子式：C22H30FO8P  度：98.0%      小鼠乳铁传递蛋白elisa试剂盒   小鼠乳铁传递蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠乳铁传递蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠乳铁传递蛋白试剂盒、小鼠乳铁传递蛋白eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
小鼠皮下结缔组织细胞；L Wnt-3A羟基脲  Hydroxyurea/Hydroxycarbamide  质量规格：>99%,BR 小鼠酶1(CA-1)ELISA试剂盒 ，英文名： CA-1 ELISA Kit
羟基脲（标准品）  Hydroxyurea/Hydroxycarbamide  质量规格：HPLC>98%,标准品 小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA检测试剂盒MouseMacrophage-DerivedChemokine,MDCELISAkit 96T/48T
枸橼酸托瑞米芬  Toremifene   质量规格：>99%,BR,可用于细胞培养  人骨保护素(OPG)试剂盒 Human Osteoprotegerin,OPG ELISA KIT
枸橼酸托瑞米芬  Toremifene   质量规格：>99%,BR,可用于细胞培养 RatFreeTestoterone,F-TESTOELISAKit大鼠游离睾同(F-TESTO)ELISA试剂盒规格：96T/48T
枸橼酸托瑞米芬（标准品）  Toremifene   质量规格：HPLC>98%,标准品 ANDROGEECEPTOR蛋白共沉淀分析试剂盒5
异环磷酰胺  Ifosfamide  质量规格：>99%,USP,BR,可用于细胞培养 MouseHeatShockProtein40,Hsp-40ELISA试剂盒小鼠热休克蛋白40(Hsp-40)ELISA试剂盒规格：96T/48T
异环磷酰胺（标准品）  Ifosfamide  质量规格：HPLC>98%,标准品 小鼠酶(CA)ELISA试剂盒 ，英文名： CA ELISA Kit
盐酸普拉克索  Pramipexole 2HCL monohydrate  质量规格：>99%,EP6.8 小鼠巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA检测试剂盒MouseMacrophageInflammatoryProtein1α,MIP-1αELISAkit 96T/48T
盐酸普拉克索（标准品）  Pramipexole 2HCL monohydrate  质量规格：HPLC>98%,标准品 人谷胱甘肽硫转移酶pi基因(GSTpi)试剂盒 Human glathione S-ansferases,GSTpi ELISA Kit
硫酸长春碱  Vinblastine Sulfate  质量规格：>97%,BR RatFreeThyroxine,FT4ELISAKit大鼠游离甲状腺素(FT4)ELISA试剂盒规格：96T/48T
注意事项：
1.接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色
，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。