Neprilysin ELISA Kit

Neprilysin ELISA Kit自备实验器材（不提供，可代购）
1． 酶标仪（主波长 450nm，参考波长 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸头：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板机或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 双蒸水，去离子水，量筒等
6． 稀释用聚丙烯试管

白抗体     0.1ml
PADI4  关节炎相关基因抗体     0.2ml
PAF  血小板活化因子抗体     0.1ml
PALB2  乳腺癌易感基因相关蛋白2     0.1ml
PAFAH2/Lp-PLA2  脂蛋白磷脂酶A2抗体     0.1ml
PAFR/PTAFR  血小板活化因子受体抗体     0.1ml
PAK1  p21激活激酶1抗体     0.1ml
PAK1  p21激活激酶1抗体     0.1ml
PAK2  p21激活激酶2抗体     0.1ml
PAI-1  纤溶酶原激活物抑制因子抗体     0.1ml
PAK4  p21激活激酶4抗体     0.1ml
Phospho-PAK4(Ser474)/PAK5(Ser602)/PAK6(Ser560)  磷酸化p21激活激酶4/5/6抗体     0.1ml
Phospho-PAK4(Ser99)  磷酸化p21激活激酶4抗体     0.1ml
PAK4  小鼠抗p21激活激酶4抗体     0.2ml
PAI-2/SerpinB2  纤溶酶原激活物抑制因子2抗体（血浆酶原激活酶抑制因子-2）     0.1ml
phospho-PAK1+PAK2+PAK3 (Ser141)  磷酸化p21激活激酶1/2/3抗体     0.1ml
Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197)  磷酸化p21激活激酶1/2抗体     0.1ml
Phospho-PAK1(Thr423)/PAK2 (Thr402)  磷酸化p21激活激酶1/2抗体     0.1ml
phospho-PAK1(Ser144)  磷酸化p21激活激酶1抗体     0.1ml
phospho-PAK2(Ser141)  磷酸化p21激活激酶2抗体     0.1ml
Phospho-PAK2 (Ser20)  磷酸化p21激活激酶2抗体     0.1ml
phospho-PAK3(Ser139)  磷酸化p21激活激酶3抗体     0.1ml
phospho-PAK1/2/3(Thr423)  磷酸化p21激活激酶1/2/3抗体     0.1ml
PAK7/PAK5/MBT  激活激酶PAK7抗体     0.2ml
phospho-PAK1(Thr212)  磷酸化p21激活激酶1抗体     0.1ml
FAM3A  胰腺衍生因子抗体     0.1ml
Neprilysin ELISA KitPAK6  P21蛋白激活的蛋白激酶6抗体     0.1ml
phospho-PAK6(Ser165)  磷酸化P21蛋白激活的蛋白激酶6     0.1ml
PAP2c/AP2-gamma  磷脂酸磷酸酶2C抗体     0.1ml
PAPK/ALS2CR2  肌萎缩侧索硬化症相关蛋白2（2号染色体）抗体     0.2ml
PPAP2A  磷酸脂磷酸水解酶1抗体     0.1ml
PPAP2C  磷酸脂磷酸水解酶2抗体     0.1ml
PAP2B  磷脂酸磷酸酶2b抗体     0.1ml
PAR-1/Thrombin receptor  蛋白酶激活受体-1抗体     0.1ml
PAR-2  蛋白酶激活受体-2抗体     0.1ml
PAR4  蛋白酶活化受体4抗体     0.1ml
Phospho-PAR4 (Thr163)  磷酸化蛋白酶活化受体4抗体     0.1ml
Parkin protein/PARK2  帕金蛋白抗体     0.2ml
phospho-PARK2(Ser101)  磷酸化帕金蛋白抗体     0.1ml
phospho-PARK2(Ser378)  磷酸化帕金蛋白抗体     0.1ml
PARP  多腺苷二磷酸多聚酶抗体/多聚ADP-核糖聚合酶1     0.1ml
PARP (N-Terminus)  多腺苷二磷酸多聚酶抗体(N端)     0.1ml
PAX1  配对盒基因1抗体     0.1ml
PAX2  配对盒基因2抗体     0.1ml
PAX3  配对盒基因3抗体     0.1ml
PAX5  配对盒基因5抗体     0.1ml
PAX7  配对盒基因7抗体     0.2ml
PAX8  配对盒基因8抗体     0.1ml
PAX9  配对盒基因9抗体     0.1ml
PBK/TOPK  PDZ连接激酶/T-LAK细胞源蛋白激酶抗体     0.1ml
Phospho-PBK/TOPK(Thr9)  磷酸化PDZ连接激酶/T-LAK细胞源蛋白激酶抗体     0.1ml
Paxillin  桩蛋白Paxillin抗体     0.1ml
Phospho-Paxillin (Tyr118)  磷酸化桩蛋白Paxillin抗体     0.1ml
Phospho-Paxillin(Tyr31)  磷酸化桩蛋白Paxillin抗体     0.1ml
Phospho-Paxillin(Tyr88)  磷酸化桩蛋白Paxillin抗体     0.1ml
试剂准备：
1. 试剂回温：首先在实验前 30 min 将试剂盒，待测样本放置于室温下，浓缩洗涤液如出现结晶，请放入37℃温浴直到结晶全部溶解。
2. 配制洗涤液：预先计算好稀释后的洗涤液使用体积，然后用双蒸水或去离子水将 20 倍浓缩洗涤液稀释成 1 倍应用液，未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。
3. 标准品梯度稀释：加入标准品/样本稀释液（SR1）0.5ml至冻干标准品中，静置15分钟待其完全溶解后轻轻混匀(浓度为8000pg/ml)，然后在其余七管中各加入500L标准品/样本稀释液（SR1），按照以下浓度进行2倍稀释：8000、4000、2000、1000、500、250、125、0 pg/ml进行稀释。8000pg/ml标准曲线高点浓度，标准品/样本稀释液（SR1）作为标准曲线的零点（0pg/ml）。复溶过的标准品原液（8000pg/ml）未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装，并将其贮存在-20～-80℃冰箱。
5. 酶结合物工作液：按每次试验所需用量配制，用酶结合物稀释液（SR3）将100倍浓缩酶结合物稀释成1倍应用工作液（稀释前离心），请在30分钟内使用。
6. 洗涤方法：
自动洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，注入洗涤液为 300ul/孔,注与吸出间隔为 30 秒，洗板 5 次。
手工洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，用洗瓶加入洗涤液 300ul/孔，静止30 秒后甩净酶标板孔中液体，在厚迭的吸水纸上拍干，洗板 5 次。

结果判断：
1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测，参考波长为 630 nm。如不能进行双波长检测，请用 450 nm 的 OD 测定值减去 630 nm 的 OD 测定值。
2.计算标准品、样品的平均 OD 值：每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值
3.以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用软件绘制标准曲线，样品中CCL28含量可通过对应OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
4.若标本 OD 值高于标准曲线上限，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。