- ￥3990
- 康朗生物
- KL-15-50220
- 中国/上海
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Pasteurella pneunotropica
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件：
负20度
- 规格：
50次
Pasteurella pneunotropica
产品及特点
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化，灵敏性高。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据非洲猪瘟病毒高度保守区设计，不会跟其他病毒的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
本产品只能用于科研。
规格及成分
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 2×Probe qPCR MagicMix | 0.5 mL（本色盖） |
| 试剂二 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 试剂三 | 侵肺巴斯德菌PCR引物 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 | 侵肺巴斯德菌qPCR探针 | 100 μL（棕色管） |
| 试剂五 | 侵肺巴斯德菌阳性对照2.0 (1×10E8拷贝/μL) |
50 μL（红盖） |
| 试剂六 | 核酸释释剂试用装 | 50次（2.5mL） |
| 使用手册 | 1 份 |
自备试剂：样品DNA。
使用方法 一、稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3.在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
7.如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。
三、Probe qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
9.如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。
10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
| 成份 | N+2 个 样品管 |
PCR 阴性 对照管 |
标准曲线 样品管（2-7管） |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 10μL | 10μL | 各10μL |
| 侵肺巴斯德菌qPCR探针 | 2μL | 2μL | 各2μL |
| 侵肺巴斯德菌 PCR引物混合液 |
2μL | 2μL | 各2μL |
| 待测样品DNA模板 | 6μL | 不加 | 不加 |
| 第7步所得标准曲线样品稀释液（2-7号） | 不加 | 不加 | 各6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…） |
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min |
| PCR 反应 （40 个循环） |
94℃ | 0.5 min |
| 55℃ | 0.5 min（采集FAM通道的荧光信号） | |
| 72℃ | 0.5 min | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
- 数据处理
12.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
13.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
荧光定量试剂对低丰度基因进行扩增定量时，较易出现无信号或者非特异性扩增，且Ct值常大于30。通过加大样本量或反应体系，亦无显著改观。其中一个重要的原因是目的基因浓度较低时，Taq酶不能有效结合到目的扩增区域，导致扩增失败。
荧光定量PCR试剂多年研发经验的基础上研发而成的定量试剂，该产品采用了抗体法热启动Taq酶。抗体与Taq酶紧密结合，在50℃反应30min条件下，仍然可以封闭95%以上的酶活，有效抑制了Taq酶结合到非目的扩增区域，限制了由于引物非特异性退火而导致的非特异性扩增。同时，配方添加了提升PCR反应扩增效率的因子，大大提升扩增效率，保证定量结果的可靠性，非常适合低浓度模板的扩增。
3.产品特点
★灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
★特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
★稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
★扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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所特有的，下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率，把引物二聚体调整到越小越好；探针法则需要设计荧光探针，这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个：完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上；这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置，根据自己试验情况而定，本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
ureolytica 解脲寡源杆菌 Oligella urethralis 尿道寡源杆菌 Pantoea spp 泛菌属某些种 Pasteurella aerogenes 产气巴斯德菌 Pasteurella gr.EF4 巴斯德菌群EF4 Pasteurella haemolytica 溶血巴斯德菌 Pasteurella multocida 多杀巴斯德菌 Pasteurella pneumotropica 侵肺巴斯德菌 Pasteurella spp 巴斯德菌属某些种
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