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文献和实验CRISPR 是一种基因编辑技术,由 Cas 核酸酶和 sgRNA 组成,可以对生物的 DNA 序列进行定向切割、修改,被 Nature 杂志列为 2013 年年度十大科技进展之一。 而将 CRISPR 与荧光成像结合,就可以建立一个活体成像系统,实现对特定基因位点标记成像,并进一步在基因的生物学功能研究中发挥着重要的作用。 在活细胞中实时监测内源基因活性对于研究基因的生物学功能并调控其表达水平至关重要。近年来越来越多证据表明,低表达基因虽然表达量较低,但是在各种生物学过程中
,然后第二天用 NucView 550 (Biotium) 施用不同浓度的星形孢菌素(STS)。NucView 550 是 caspase-3 荧光探针,死细胞核用红色荧光染色。用 STS 和 NucView 550 处理后,将 HT-29 微球用 4% 多聚甲醛固定并用 0.5%Triton X-100 / PBS(-)通透性处理。微球的细胞核在 4°C(39.2°F)下用 Hoechst 33342 过夜染色。染色后,用 SCALEVIEW-S4 将微球透明化。 成像和分析 我们使用 FV
研究应用|使用 NanoBiT 技术进行的蛋白质相互作用细胞内定位成像
和 NLS-FKBP/RRB NanoBiT 的细胞内定位 实验条件: 显微镜:IXplore Live for Luminescence 显微镜系统 相机:imagEM EM-CCD 相机 (Hamamatsu Photonics) 物镜:LUCPLFLN60XPH 成像透镜:0.35X EM 增益:1200 呋喃嗪浓度:1/200 稀释 西罗莫司最终浓度:30 nM 曝光时间:相衬 50 ms/生物发光 3 min/荧光 100 ms 图 4 显示了西罗莫司刺激前后的 NLS-FKBP
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