猪轮状病毒通用RT-PCR试剂盒

猪轮状病毒通用RT-PCR试剂盒

Porcine rotavirus

产品及特点

轮状病毒病，是由猪轮状病毒引起的猪急性肠道传染病，的主要症状为厌食、 呕吐、下痢，中猪和大猪为隐性感染，没有症状。病原体除猪轮状病毒外，从小 孩、犊牛、羔羊、马驹分离的轮状病毒也可感染仔猪引起不同程度的症状。轮状 毒对外界环境的抵抗力较强，在 18-20℃的粪便和乳汁中，能存活 7-9 个月。本 产品根据 PCR 原理开发，可用于科研领域快速检测猪轮状病毒。它具有下列特点：

 

 

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据猪轮状病毒通用的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间 转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

猪轮状病毒通用RT-PCR试剂盒规格及成分

编号	成  份	规格
试剂一	5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黄盖）
试剂二	MMLV-Taq Mix	75 μL（红盖）
试剂三	超纯水	1 mL（亮黄盖）
试剂四	猪轮状病毒通用 RT-PCR 引物 混合液	100 μL（白盖）
试剂五	猪轮状病毒通用 RT-PCR 阳性 对照（1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂六	天净沙核酸释放剂（试用装）	20 次（1mL，绿盖）
试剂七	使用手册	1 份）

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。 

自备试剂 样品 RNA
 

 

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 流行性出血热病毒 PCR 阳性对照的 100 倍稀释作为制备的阳性对照；用水作为制备的阴性对照。 制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

成分	样品	阳性对照	阴性对照
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
猪轮状病毒通用 RT-PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2 个制备的 RNA 样品	各12.5 μL
超纯水		12.5 μL
猪轮状病毒通用 RT-PCR 阳性对照 的 100 倍稀释液	L		12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程	温度	时间
逆转录	42℃	30 min
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
延伸	72℃	7 min

 

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物， 则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、 阳性对照有 122bp 预期的扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果， 如果有扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！