单核细胞增生李斯特菌PCR试剂盒

单核细胞增生李斯特菌PCR试剂盒

Listeria monocytogenes

产品及特点

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)属乳酸杆菌科，为革兰氏阳性小杆菌，可以污染食品，导致李斯特病的发病率日趋上升，临床表现主要有脑膜炎、败血性肉芽肿、淋巴结肿大等。本病遍及世界各地，是人畜共患的传染病。人类感染有增多趋势，特别是新生儿、老年人、孕妇及免疫功能低下者易感性更高。对食品中的单增利斯特菌做出快速的检测和鉴定，是预防利斯特病的有效方法，因此单核细胞增生李斯特菌的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本试剂盒根据荧光定量PCR原理开发，它具有下列特点： 

 

1.即开即用，用户只需要提供细菌DNA模板。
2.引物经过精心优化，专一性强，只扩增单核细胞增生李斯特菌。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5.本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次。
6.本产品只能用于科研。

单核细胞增生李斯特菌PCR试剂盒规格及成分

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.	1 mL（亮黄盖）
试剂二	超纯水	1 mL（蓝色）
试剂三	单核细胞增生李斯特菌 PCR 引 物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	单核细胞增生李斯特菌PCR阳性对照	100 μL（黄盖）
试剂五	天净沙DNA释放剂试用装	50次（试用装）
试剂六	使用手册	1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 样品 DNA。
 

 

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此 作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。 

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分： 

成分	N+2个 样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
单核细胞增生李斯特菌PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样品DNA模板	各18 μL	-	-
样品制备阴性对照	-	18 μL	-
样品制备阳性对照	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	94℃	5 min
PCR反应 （35个循环）	94℃	20 sec
	50℃	20 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	10 min

 

 

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！