禽网状内皮组织增殖病病毒RT-PCR试剂盒

禽网状内皮组织增殖病病毒RT-PCR试剂盒

Avian Reticuloendotheliosis Virus(REV)

产品及特点

网状内皮增殖病是由网状内皮组织增殖症病毒（Reticuloendotheliosis Virus， REV）引起的一种肿瘤性传染病，病鸡表现为贫血、消瘦，生长缓慢等。病理解剖特点 是肝脏、肠道、心脏和其它器官有淋巴瘤，胸腺和法氏囊萎缩，腺胃炎。本病能侵害机体 的免疫系统，可导致机体免疫机能下降或继发其它疾病。本产品就是专门用于 REV 的 RT-PCR 检测的试剂盒，它具有下列特点： 

 

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 RNA 模板。

2. 提供阳性对照，便于在遇到问题时分析原因。

3. 引物根据 REV 病毒保守的 LTR 序列设计，不与其他病毒发生交叉反应。

4. 使用两步式 RT-PCR，先做 RT 再做 PCR，操作更加灵活。

5. 本试剂盒灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

6. 本试剂盒足够 50 次 20 μL 体系的 RT 反应，50 次 40 μL 体系的 PCR 反应。

7. 本产品只用于科研

禽网状内皮组织增殖病病毒RT-PCR试剂盒规格及成分

编号	成分	规格
试剂一	MMLV（含 RI）	50 μL（黄盖）
试剂二	RT Buffer（含 dNTP）	250 μL（白盖）
试剂三	超纯水	1 mL（本色盖））
试剂四	PCR MagicMix 3.0（含染料）	1 mL（红盖）
试剂五	网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂六	网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR 阳性对照	50 μL（黄盖）
试剂七	RNA 病毒裂解液（试用装）	15 次（10mL）
试剂八	使用手册	1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到试剂盒后请将阳性对照放置到专 门区域，因为其含有较高浓度的扩增产物，容易污染其他试剂。  

自备试剂 样品RNA
 

 

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 禽传染支气管炎病毒 通用 RT-PCR 阳性对照的 100 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10E6 拷贝/μL， 10μL 相当于 1 万拷贝，可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中， 充分混匀，此为 100 倍稀释液。）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加 水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用 水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 次 RNA 提取，则按照下表设置 N+2 个 RT 反应体系（20 μL 体系）： 

成分	用量
RNA 模板（自备）	1-10 μL 即可
网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR 引物混合液	2 μL
超纯水	补水到 14 μL
RT Buffer(含 dNTP)	5 μL
MMLV（含 RI）	1 μL

4. 42℃保温 60 min，70℃保温 10 min 以终止反应，然后放置在冰上待用。此为 cDNA 样品。

三、设置 PCR 反应

5. 对 N+2 个 cDNA 样品，则在 N+4 个 PCR 管中加入下列成分（多的一个是 PCR 阴 性对照，一个是 PCR 阴性对照）：

成分	N+2个制备所得样品	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	20 μL	20 μL	20 μL
网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR 引物混合物	2 μL	2μL	2μL
N+2 个 cDNA 样品	5 μL
网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR 阳性对照
补超纯水到	40 μL	40 μL	40 μL

 6. 上机进行 PCR，PCR 反应参数为：

过程	温度	时间
逆转录	42℃	60 min
预变性	94℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	94℃	0.5 min
	55℃	0.5 min
	72℃	0.5 min
最后延伸	72℃	10 min

 

7. 取 10uL PCR 产物直接在 1%琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为 220 bp。 阳性对照必须出现 220bp 的 PCR 产物，否则 RT-PCR 体系有问题，需要寻找原因。 如果阴性对照出现 220bp 的 PCR 产物，则说明试剂或环境中有过去 PCR 产物的污 染，需要把样品制备和 PCR 反应后电泳充分隔离进行。如果发生了污染，则需要另 外设计引物，本试剂盒提供的引物和阳性对照将不可用。 

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

 ​​​​​​​