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- 2025年11月09日
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【包装规格】5次
【预期用途】
用于多种植物组织中的基因组 DNA 的提取，富集，纯化等步骤。其处理后的产物可用于酶切、PCR、文库构建、Southern 等实验。
【检验原理】
改进的CTAB 植物 DNA 抽提液（添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份）迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，通过离心清除多糖、多酚和蛋白质，然后基因组 DNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心步骤, 进一步将残留的多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 后低盐的洗脱缓冲液将基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。
【主要组成成分】
试剂盒由平衡液，Buffer P1，Buffer P2，Buffer P3，RNase A，漂洗液 WB，洗脱缓冲液 EB，吸附柱 AC，分离柱 A，收集管（2mL），使用说明书组成。
注：第一次使用前请先在漂洗液 WB 瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
【实验所需试剂但未提供的物品】
*无水乙醇
*β-巯基乙醇（可选）
【储存条件及有效期】
1、Buffer P1 可在常温保存 1-3 个月，长期保存-20℃条件下保存；Buffer P2，Buffer P3 可在 4℃保存 1 个月，长期保存-20℃条件下保存；RNase A 在-20℃条件下保存；其他试剂可常温保存。
2、本试剂盒有效期一年，请在有效期内使用。
3、为了避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
【适用仪器】
本产品可适用于匹配 1.5/2.0 mL 离心管的高速离心机。
【样本要求】
新鲜或保存得当的植物样品。样本采集后尽快实验，可在 2~8℃暂时保存；若需长期保存， 应置于-20℃或-80℃环境中。
【使用方法】
*第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇!
*将 Buffer P1 和洗脱缓冲液 EB 放置在 65℃预热, Buffer P1 使用前可加入β-巯基乙醇到终浓度 0.2%(针对容易褐化样本，一般样本可不加)。
1.（可选步骤）柱平衡步骤：向吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中）加入 500μL 的平衡液，12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的下滤液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用处理过的柱子。柱平衡后有助于核酸得量的提升。）
2.取适量植物组织在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
3.转移细粉（植物新鲜组织 100 mg 或干重组织 30 mg）到一个 1.5mL 离心管，不要解冻，加入 550μL 65℃预热 Buffer P1 和 4μLRNase A，剧烈涡旋振荡混匀 1 分钟，室温放置10 分钟。
4.加入 130μL 的 Buffer P2, 剧烈涡旋振荡混匀 1 分钟，12000rpm 离心 3 分钟。
5.小心吸取上清到分离柱 A 中，注意不要吸到界面物质，12,000 rpm 离心 1 分钟，收集下滤液。
6.转移下滤液到一个新的 2 mL 离心管中，加入 1.5 倍体积的 Buffer P3 立刻轻柔涡旋， 充分混匀。
7.将上一步所得混合物（包括可能出现的沉淀）加入一个吸附柱 AC 中，（吸附柱放入收集管中）12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液（吸附柱 AC 单次上样量多 700 μL, 若样本量大于 700 μL 需分多次过柱）。
8.加入 700μL 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心 1 分钟，弃掉废液。
9.加入 500μL 漂洗液 WB，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃掉废液。
10.将吸附柱 AC 放回空收集管中，13,000 rpm 离心 3-5 分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
11.取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 50μL 洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在 65℃水浴中预热）， 室温放置 3-5 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟收集 DNA。洗脱体积越大，洗脱效率越高，可以 50μL 分两次洗脱，提高洗脱效率。
12.DNA 可以存放在 2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在-20℃。
【产品性能指标】
1.pH 值:
在 25℃±2℃条件下测定， 以下组分的 pH 值需满足下表要求:
| 组分名称 | pH 值 |
| 漂洗液WB | 7.5± 0.2 |
| 洗脱缓冲液 EB | 8.5± 0.2 |
- 核酸提取效果：不同来源的植物组织材料中提取的 DNA 的量会有差异，一般 100mg 新鲜组织典型产量可达 3-30μg。
| 植物材料 | 提取量 | DNA 产量 |
| 拟南芥 | 100 mg | 3~4 ug |
| 小麦叶片 | 100 mg | 25~30 ug |
| 烟草 | 100 mg | 20~25 ug |
| 玉米叶片 | 100 mg | 20~30 ug |
| 水稻叶片 | 100 mg | 10~25 ug |
【注意事项】
1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到12，000 rpm的台式离心机，如百泰克CK1260 或者类似离心机。
2.开始实验前将需要水浴的物品先预热到65℃备用。
3.Buffer P3中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA, 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该PH大于7.5, PH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，PH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
5.Buffer P1、Buffer P3低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
【疑难解答】
DNA产量低
处理材料过量或者裂解不完全
RNA残留
植物RNA含量太丰富
未提取到DNA
漂洗液WB中忘记加无水乙醇
洗脱下来的DNA溶液带颜色或者膜上有明显的色素残留
漂洗次数不够
起始材料太多过量
洗脱下来的DNA产量低
离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇使用了水或者其它非佳液体代替洗脱缓冲液A260吸光值异常偏高
一些硅基质膜成分一起洗脱下来，干扰了吸光值
DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全
一些硅基质膜成分一起洗脱下来，抑制了酶切反应
离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇抑制了酶切反应
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no.DQ434847）转入烟草（Nicotiana tabacum L.cv.W38），所得T0代植株在16h光照（25℃）/8h黑暗条件下培养。1.2 方法1.2.1 转基因植物的PCR鉴定 随机挑取六株T0代转基因烟草，采用植物基因组DNA提取试剂盒（北京天根生化科技有限公司）提取基因组DNA模板，另外分别以未转化的野生型烟草基因组DNA以及含有OSsec27p的重组质粒作为阴性和阳性对照模板，使用OSsec27p基因特异性引物进行PCR扩增。 取部分扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳检测，检测
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以下操作按照天根产品 DP320 新型植物基因组 DNA 提取试剂盒的说明书进行，所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品，样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备：1. 植物叶片2. 研钵 液氮3. 移液器及配套无菌枪头（10 μl ，200 μl ，1ml），1.5 ml离心管4. 无水乙醇5. 涡旋振荡器，金属浴/水浴，台式离心机实验准备-试剂盒准备：使用前先在漂洗液PW和LP3中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。本文版权归天根生化科技（北京）有限
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