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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Porcine Endogenous Retrovirus(PERV) Provirus
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件:
负20度
- 规格:
50次
Porcine Endogenous Retrovirus(PERV) Provirus
产品及特点
1. 即开即用,用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增猪内源性逆转录病毒前病毒PCR试剂盒,与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次,但只能用于科研。
规格及成分
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 2×PCR MagicMix | 1 mL(红盖) |
| 试剂二 | 超纯水 | 1 mL(亮黄色) |
| 试剂三 | 猪内源性逆转录病毒前病毒PCR试剂盒 PCR 引物混合液 | 100 μL(白盖) |
| 试剂四 | 猪内源性逆转录病毒前病毒PCR试剂盒 PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50 μL(黄盖) |
| 试剂五 | 使用手册 | 1 份 |
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品,则需要做N+2个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL 猪内源性逆转录病毒前病毒PCR试剂盒 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对N+2个样品,在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性
对照,故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分:
| 成份 | N+2 个 样品管 |
PCR 阴性 对照 |
PCR 阳性 对照 |
| PCR Magic Mix 3.0 | 各 20μL | 20μL | 20μL |
| 猪内源性逆转录病毒前病毒PCR试剂盒PCR 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
| N+2个样品 DNA模板 |
各18μL | -- | -- |
| PCR 阴性对照(水) | -- | 18μL | -- |
| PCR 阳性对照(猪内源性逆转录病毒前病毒PCR试剂盒PCR阳性对照1000倍稀释液) | -- | -- | 18μL |
- 按下表设置 PCR 反应:
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应 (35 个循环) |
95℃ | 30 sec |
| 55℃ | 30 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测PCR产物。本产品提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有 551bp 大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。
本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应,能够获得更长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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文献和实验佚名 本世纪以来生物学、分子生物学研究证实许多动物和禽类中存在RNA肿瘤病毒,它们或以水平传播方式从一个动物传给另一个动物;或以垂直传播方式传给子代的生殖细胞和体细胞。前者为外源性感染,后者为内源性感染。70年代发现逆转录酶后把RNA肿瘤病毒归为逆转录病毒科(Retroviridae)肿瘤病毒亚科 (Oncovirinae)。在DNA
的转基因微型猪,这些微型猪被设计成人类疾病模型。尽管微型猪仍然是一种有益的医学模式,但对BGI来说,却是另一种有趣的商业机会:该研究所今年早些时候宣布,这些动物也将作为宠物出售。在猪身上的应用仍然是基因组编辑发展议程上的重要议题;而且有一个很好的理由:猪是许多人类疾病的有价值的模型,而且它们的生理学与人类有些相似,它们的器官大小刚好合适——它们仍然是异种移植的最佳候选对象。然而,利用猪器官进行移植的努力长期以来一直受到似乎无法解决的人猪差异的阻碍:危险物种特异性内源性逆转录病毒的存在。不过,就在上个
(minor lymph'ocyte stimulating antigen,Mlsag)。 近年来证明这种内源性MLs抗原是小鼠乳腺肿瘤病毒(mouse mamary umor virus,MMTV)产生的蛋白。MMTV是一种逆转录病毒,以前病毒(provirus)形式整合于小鼠细胞DNA中。这种小鼠可终生制造这种病毒蛋白,因之可视为一种自身超抗原。这种小鼠内源性MLs抗原的化学性质现已证明是一种糖蛋白。 由于MLs抗原的来源已经清楚,故目前称这种小鼠的内源性超抗原为病毒性超抗原。人类
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