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文献和实验真香!用 qPCR 做外泌体研究,南京医科大学拿下 41 分 SCI
方法 1. 外泌体 RNA 如何提取? 外泌体 RNA 可以用专用的外泌体 RNA 提取试剂盒提取,也可以用 Trizol 法提取,建议 Trizol 与外泌体的体积比不小于 4:1(也可以用 Trizol 直接裂解外泌体沉淀)。 2. 外泌体 RNA 如何定量? 外泌体 RNA 含量很低,不建议使用微量紫外分光光度计定量,可以使用 Agilent 2100 生物分析仪等定量,也可以直接按最大体积进行逆转录实验。 3. 外泌体做 qPCR 检测应该选什么参照? 外泌体没有通用的内参选择,可以使用外参(cel
MarathonTM所得到的片断总是比采用SMARTTM RACE试剂盒到所得到的片断短。其原因在于MarathonTM技术反转录反应往往不能真正达到mRNA的5' 末端。所以认为,进行RACE反应应当优选SMARTTM RACE试剂盒。以下就国内目前应用最广的SMARTTM RACE试剂盒为例,简要概述RACE技术的原理和操作过程。 SMARTTM 3'-RACE的原理 利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以连有SMART寡核营酸序列通用接头引物的Oligo(dT)30MN
激活的调控 A.CⅡTA分子结构。N端棕色部分显示乙酰基转移酶活性,并与协同激活因子CBP和B。b1等结合;P/S/丁:富含脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸结构域;ATP/GTPB:指带有相应结构的结构域;RFX结合:指能与Ⅱ类基因启动子区转录因子RFX、NP―Y等结合的部位。B.CⅡTA分子C端与已结合于HLAⅡ类基因(此处以DRA为例)启动子区的多组分转录因子结合之后,N端与通用转录复合体(GTC)及协同激活因子结合,通过表观遗传学机制(包括组蛋白乙酰化及转录延伸)启动对Ⅱ类基因的转录
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