WHEATON 旋盖（不含离心管）

人外周血单细胞悬液制备流程及注意事项

人外周血单细胞悬液制备流程 1.采集人外周血样本于抗凝管中。 离心管内加入100 μL新鲜血和2 mL 1×红细胞裂解液，混匀，4℃裂解10 min。 300 g离心5 min（裂解完立即离心，防止时间过长损伤细胞），弃上清，得到白色细胞沉淀。 PBS洗涤一次。 加入100 μL细胞染色缓冲液重悬细胞，不用计数，即可进行后续流式抗体染色实验。按照100 μL新鲜血样本制备的单细胞悬液，加入1 Test对应的流式抗体混匀进行后续实验。 注意事项： 1. 采血用抗凝管，有肝素和EDTA两种

小鼠外周血单细胞悬液制备流程及注意事项

小鼠外周血单细胞悬液制备 采集小鼠外周血样本于抗凝管中。 离心管内加入 100 μL 新鲜血，加入 1 Test 对应流式抗体，混匀，4℃ 避光孵育 30 min。 加入 2 mL 1×红细胞裂解液，混匀，4℃ 裂解 5 min。 300 g 离心 5 min（裂解完立即离心，防止时间过长损伤细胞），弃上清可得到白色的细胞沉淀。 PBS 洗涤一遍。 加入 200 μL 细胞染色缓冲液重悬细胞，用流式细胞仪进行检测和分析。 注意事项： 采血用抗凝管，有肝素和 EDTA 两种，若直接裂解

如何获得高质量的细胞上清液外泌体？

基（DMEM、1640、F12 等） ✘ 此种培养条件细胞处于饥饿状态，会将培养基中的营养物质（包括外泌体）全部消耗掉的，上清液中的外泌体含量低。 4 外泌体专用无血清培养基 ✔ 不含异源外泌体 常见的肿瘤细胞培养通常都可以维持生长，而那些血清培养都困难的细胞就难以通用了，需要通过预实验摸索。 第二步细胞上清液预处理：获得高质量外泌体预处理也很重要。细胞上清液中有什么物质？除了我们感兴趣的外泌体外，还有少量细胞、细胞碎片、游离蛋白、脂类等。需要做的就是通过差速