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- 2025年11月23日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
在零下15度以下保存, 避免光照
- 保质期：
2年
- 英文名：
Helixyte™ Green *10,000X Aqueous PCR Solution*
- 库存：
现货
- 供应商：
AAT Bioquest
Cyber Green 10000X水溶液PCR定量
| 货号 | 17592 | 存储条件 | f/l |
| 规格 | 1 ml | ||
| Ex (nm) | 498 | Em (nm) | 522 |
| 分子量 | N/A | 溶剂 | DMSO |
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
Cyber Green 染料是美国AAT Bioquest生产的一种绿色荧光核酸染料，具有使染料可用于多种应用的功能，包括qPCR，熔解曲线分析，嗜热解旋酶依赖性扩增（tHDA）的实时监测，常规溶液DNA定量和结晶染料的激发和发射光谱与荧光素（FAM）或SYBR®GreenI的激发和发射光谱非常接近，使染料与配备488 nm氩激光器或任何可见光激发波长的仪器兼容。 Green 染料在热和水解方面都非常稳定，在日常处理过程中提供了便利。染料本身基本上是非荧光的，但在与dsDNA结合后变得高度荧光.Cyber Green 染料的独特性质使其在定量实时PCR（qPCR）应用中特别有用。与广泛使用的SYBR Green I相比，Cyber Green 对PCR的抑制作用较小，不太可能引起非特异性扩增。因此，Cyber Green 可以比SYBR Green我高得多的染料浓度使用，从而产生更强大的PCR信号。更重要的是，定量PCR允许的较高的CYber Green 浓度消除了“染料再分布”问题，这可能在PCR后DNA融解曲线分析期间与SYBR Green一起发生。
Cyber Green 20X水溶液专为qPCR使用而配制。可以使用现有的SYBR Green I或FAM光学设置在任何商业实时PCR循环仪上监测PCR反应。下面提供的qPCR协议用于使用常规非热启动Taq的PCR。使用热启动Taq可能需要在离子强度和pH方面对PCR缓冲液组成进行一些调整，以最好地利用Cyber Green 。例如，化学修饰的Taq，例如AmpliTaq Gold，可能更喜欢不含KCl的和较高的的Tris浓度（高达50mM的）。此外，经常加入水溶性溶剂如DMSO或甘油以稳定主混合物。可能需要根据所用的酶优化这些组分和pH值。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cyber Green 核酸凝胶染料。
产品说明书
染色方案
建议将以下方案用于非热启动Taq酶。
1.设置PCR反应如下：
5μL不含Mg+2的10倍的聚合酶缓冲液
2.5μL50mMMgCl2
每种5mM的2mM dNTP
2.5μL20XCyber Green
1-5单位的Taq DNA聚合酶
每种引物0.1-1μM（最终浓度）
双蒸水至终体积为50μL。
2.在热循环荧光计上进行实时PCR，并在退火或延伸步骤记录荧光信号。
注意：使用ABI序列检测系统时，请确保在WELL INSPECTOR选项卡下为被动参考选择NONE。
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分析.4、几个概念：（1）扩增曲线 ：（2） 荧光阈值：（3）Ct值：CT值的重现性：5、定量原理：理想的PCR反应： X=X0*2n非理想的PCR反应： X=X0 (1+Ex)nn：扩增反应的循环次数X：第n次循环后的产物量X0：初始模板量Ex：扩增效率5、标准曲线6、绝对定量1）确定未知样品的 C(t)值2）通过标准曲线由未知样品的C(t)值推算出其初始量二、实时荧光定量PCR的几种方法介绍 方法一：SYBR Green法 （一）工作原理 1、SYBR Green 能结合到双链DNA的小沟
Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
TaqMan@探针和分子信标，利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加；一类为非探针类，其中包括如 SYBR@Green I 或者特殊设计的引物(如 LUX @Primers ) 通过荧光染料来指示产物的增加。 3.1 Taqman@探针法 Taqman@探针是最早用于定量的方法。就在 PCR 扩增时加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸：5’端标记一个报告荧光基团，3’端标记一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，也就是 FRET 反应
PCR反应通过变性、退火、延伸三个循环步骤，使目标DNA片段曾指数扩增。 因此，PCR系统是一个极其灵敏的信号放大系统，能将极微弱、甚至是单拷贝的基因信号检测出来。 但是常规的PCR不能反映起始样本中目的基因的含量水平，从而限制了它在临床检测中的应用。 荧光定量PCR是指通过实时监控PCR体系中的荧光信号，对样本中初始模板进行定量分析的一项新技术。定量PCR可实时检测产物量，通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线，然后根
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