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Helixyte Green 双链DNA荧光定量试剂盒
| 货号 | 17651 | 存储条件 | f/l |
| 规格 | 200 Tests | ||
| Ex (nm) | 501 | Em (nm) | 520 |
| 分子量 | 溶剂 | ||
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
Helixyte Green 双链DNA荧光定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于DNA定量的试剂盒,Helixyte 绿色dsDNA定量测定试剂盒可用于在ssDNA,RNA和游离核苷酸存在的情况下选择性地检测低至25 pg / ml的dsDNA。 Helixyte Green与dsDNA结合后显示出较大的荧光增强。 该测定法在三个数量级上是线性的,并且几乎没有序列依赖性,使您能够准确地测量来自多种来源的DNA,包括基因组DNA,病毒DNA,微量制备DNA或PCR扩增产物。 Helixyte 绿色dsDNA定量分析试剂盒比紫外吸收读数的灵敏度高几个数量级。 在等摩尔量的RNA存在下,它对dsDNA具有特异性。 该套件具有混合和读取格式的强大功能。 它可以与台式荧光计或手持式荧光计(例如Qubit荧光计)一起使用。 该试剂盒是Quant-iT PicoGreen®dsDNA分析试剂盒(Quant-iT 和PicoGreen®是Invitrogen的商标)的替代品。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Helixyte Green 双链DNA荧光定量试剂盒。
产品说明书
样品实验方案
简要概述
向每个比色皿中添加1mL dsDNA标准液或测试样品
加入1mL Helixyte Green 工作溶液
在室温下孵育5-10分钟
监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光
溶液配制
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1分析缓冲液(1X)
用无菌,蒸馏,无DNase的水将浓缩的缓冲液稀释20倍,从而制备1X检测缓冲液。
2.标准溶液
dsDNA标准
对于高范围标准曲线:
将30 µL 100 µg / mL dsDNA储备溶液(组分C)添加到1.47 mL的1X分析缓冲液中以得到2000 ng / mL dsDNA溶液,然后进行1:2和1:10连续稀释以获得1000、100、10 ,1和0 ng / mL。
对于低范围标准曲线:
将40 µL 2 µg / mL dsDNA储备液添加到1.56 mL 1X分析缓冲液中,以得到50 ng / mL dsDNA溶液,然后以1:2和1:10连续稀释以获得25、2.5、0.25、0.025和0 ng / mL。
3.工作溶液
通过在1X分析缓冲液中将浓缩的DMSO溶液稀释200倍来制备Helixyte Green 工作溶液。 例如,要准备足够的工作溶液以测定2 mL最终体积中的10个样品,请将50μLHelixyte Green (组分A)添加到10 mL分析缓冲液(组分B)中。 通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。 注意:我们建议在塑料容器中而不是玻璃中制备此溶液,因为染料可能会吸附到玻璃表面。 为了获得最佳结果,该溶液应在准备后的几个小时内使用。
样品示例及操作
1.向每个装有1 mL dsDNA标准品,空白对照和测试样品的比色皿中加入1 mL Helixyte Green 工作溶液,以使dsDNA测定总体积为2 mL /比色皿。
2.在避光条件下,于室温下孵育反应5至10分钟。
3.使用分光光度计在Ex / Em = 490/525 nm处监视荧光的增加。 注意:为使光漂白效应最小化,请对所有样品保持恒定的荧光测量时间。
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文献和实验地点:中国农科院重大工程楼 107 为检验BioTeke公司实时荧光定量试剂(SYBR GreenⅠ)质量,本次实验分别采用国际知名的ABI公司(ABI Power SYBR Green PCR Master Mix)、TOYOBO公司(Realtime SYBR GreenⅠPCR Master Mix)和BioTeke公司产品进行实时荧光定量PCR分析,实验过程中除了荧光定量试剂Mix不同,其它反应条件(模板、引物和反应
了长足的发展,比如BioTeke公司的荧光定量系列产品就以其优良的品质和亲民的价格越来越受到国内用户的青睐,目前还可以申请试用装。为了证明其荧光定量系列产品的品质,BioTeke公司特邀请了山东大学细胞发育遗传学实验室进行了BioTeke的SYBR GREEN I实时荧光定量产品和T公司的实时荧光定量试剂的比对实验。具体实验如下:实验材料小鼠肝脏组织山东大学实验室提供样品cDNA实验方法RNA提取:Bioteke RNApure高纯总RNA提取试剂盒,操作步骤请参考说明书。目的基因:小鼠管家基因β–
分析.4、几个概念:(1)扩增曲线 :(2) 荧光阈值:(3)Ct值:CT值的重现性:5、定量原理:理想的PCR反应: X=X0*2n非理想的PCR反应: X=X0 (1+Ex)nn:扩增反应的循环次数X:第n次循环后的产物量X0:初始模板量Ex:扩增效率5、标准曲线6、绝对定量1)确定未知样品的 C(t)值2)通过标准曲线由未知样品的C(t)值推算出其初始量二、实时荧光定量PCR的几种方法介绍 方法一:SYBR Green法 (一)工作原理 1、SYBR Green 能结合到双链DNA的小沟
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