荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒 *红色荧光*

Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测乙酰胆碱脂酶的试剂盒，乙酰胆碱酯酶（AChE）是神经反应和功能重要的酶之一。AChE将神经递质乙酰胆碱（ACh）降解为胆碱和乙酸。它主要见于神经系统的神经肌肉接头和胆碱能神经突触，其活动用于终止突触传递。AChE抑制剂是批准用于阿尔茨海默病（AD）和重症肌无力的关键之一。

我们的Amplite 比色乙酰胆碱酯酶检测试剂盒为检测AChE活性提供了便利的方法。它使用DTNB来量化由血液，细胞提取物和其他溶液中的AChE水解乙酰硫代胆碱产生的硫代胆碱。DTNB加合物的吸收强度用于测量形成的硫代胆碱的量，其与AChE活性成比例。该试剂盒提供比色一步法检测，在100μL检测体积（1 mU / mL）内检测低至0.1 mU AChE，如图1所示。其信号可通过吸光度酶标仪在~410 nm处轻松读取。该试剂盒，可用于持续监控AChE活动。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒。

 

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

96孔板测定示例

概述

准备AChE反应混合物（50μL）

加入AChE标准品或AChE测试样品（50μL）

在室温下孵育10-30分钟监测410±5 nm的吸光度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.准备库存解决方案：

1.120X DTNB储备溶液：将0.6mL测定缓冲液（组分B）加入到DTNB（组分A）的小瓶中以制备20X DTNB储备溶液。

注意：未使用的DTNB储备溶液应分为单次使用的等分试样。 储存在-20℃并避光。

1.220X乙酰硫代胆碱储备溶液：将0.6mL ddH 2 O加入乙酰硫代胆碱的小瓶中（组分C）。

注意：未使用的20X乙酰硫代胆碱原液应分成一次性等分试样，并在20℃下保存。

1.3乙酰胆碱酯酶储备液：将100μLDdH2O与0.1％BSA加入乙酰胆碱酯酶标准品（组分D）中，制成50单位/ mL乙酰胆碱酯酶储备液。

注意：未使用的乙酰胆碱酯酶原液应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

 

2.制备乙酰硫代胆碱反应混合物：

根据说明书中表1制备乙酰硫代胆碱反应混合物并避光。

Components	Volume
Assay Buffer (Component B)	4.5 mL
20X DTNB Stock Solution (from Step 1.1)	250 mL
20X Acetylthiocholine Stock solution (from Step 1.2)	250 mL
Total volume	5 mL

 

3.准备连续稀释的乙酰胆碱酯酶标准品（0至1000 mU / mL）：

3.1将20μL的50单位/ mL乙酰胆碱酯酶储备液（来自步骤1.3）加入到980L的测定缓冲液（组分B）中以产生1000mU / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液。

注意：稀释的乙酰胆碱酯酶标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL1000mU / mL乙酰胆碱酯酶标准品进行1：3连续稀释，得到300,100,30,10,3,1和0 mU / mL连续稀释的乙酰胆碱酯酶标准品。

3.3如说明书中表2和3中所述，将含有乙酰胆碱酯酶标准品和含乙酰胆碱酯酶的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微量培养板中。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

 

4.运行乙酰胆碱酯酶测定：

4.1将50μL乙酰硫代胆碱反应混合物（来自步骤2.1）加入乙酰胆碱酯酶标准品，空白对照和测试样品（见步骤3.3）的每个孔中，使总乙酰胆碱酯酶测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL乙酰硫代胆碱反应混合物。

4.2在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

4.3使用吸光度酶标仪在410±5 nm处检测吸光度的增加。