- ￥800
- EZBioscience
- EZ1301
- 苏州
- 2026年04月23日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
充足
- 英文名：
Bradford Protein Quantification Kit (Detergent Compatible)
- 保质期：
可稳定保存12个月。过期日期详见产品标签中有效期信息。
- 供应商：
EZBioscience
- 保存条件：
EZ-Bradford Reagent (Detergent Compatible)建议置于4°C保存，BSA Standard (20 mg/ml)建议置于-20°C保存，可稳定保存12个月。过期日期详见产品标签中有效期信息。
- 规格：
500 Tests
产品简介
Bradford法（考马斯亮蓝法），是目前灵敏度最高的蛋白质浓度测定方法之一。当Bradford染色液（考马斯亮蓝G250）和蛋白在酸性条件下结合时，溶液颜色由棕黑色转为蓝色，最大吸光值波长由456 nm转移为595 nm。吸光值与蛋白质的含量在一定浓度范围内有较好的线性关系，通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值，即可推算出样品的蛋白浓度。本试剂盒Bradford Protein Quantification Kit (Detergent Compatible)和常规的Bradford蛋白浓度测定试剂盒相比，可以兼容一系列常见的去垢剂（如SDS、Triton X-100、Tween-20等），同时兼容多种常见蛋白裂解液（如RIPA裂解液、NP-40裂解液等），克服了Bradford法对去垢剂敏感的缺点，并具有检测速度快、稳定和灵敏度高等特点，大大提高了Bradford法蛋白浓度测定的适用范围。
产品组分
|
组分 |
EZ1301-T (50 Tests) |
EZ1301 (500 Tests) |
|
EZ-Bradford Reagent (Detergent Compatible) |
15 ml |
150 ml |
|
BSA Standard (20 mg/ml) |
100 μl |
1 ml |
保存条件
EZ-Bradford Reagent (Detergent Compatible)建议置于4°C保存，BSA Standard (20 mg/ml)建议置于-20°C保存，可稳定保存12个月。过期日期详见产品标签中的有效期信息。
注意事项
1. BSA Standard (20 mg/ml)请在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。
2. 将EZ-Bradford Reagent (Detergent Compatible)恢复到室温（15 ~ 25°C）再使用，有利于提高检测的灵敏度。
3. 需要可检测560 ~ 610 nm之间波长的酶标仪一台，最佳检测波长为595 nm；并需自备96孔板。
4. 反应在10 min后反应充分，时间过长可能会有沉淀，建议在30 min内完成检测。
5. 测量范围为25 ~ 2000 μg/ml，可根据待测样品浓度调整标准曲线浓度范围。
6. 本产品为去垢剂兼容型，可耐受4% SDS，4% Triton X-100以及RIPA，NP-40，Western等常见蛋白裂解液。
7. 为了您的安全和健康，请穿戴实验服、一次性乳胶手套和一次性口罩。
操作步骤
1. 蛋白标准品的准备
1.1 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本产品检测的物质，可以用PBS稀释标准品。BSA Standard (20 mg/ml)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。
1.2 按照下表配制蛋白标准。每次稀释时注意充分混匀。
|
编号 |
稀释液体积 |
标准品体积 |
最终浓度 |
|
A |
90 μl |
10 μl |
2000 μg/ml |
|
B |
25 μl |
从A管取75 μl |
1500 μg/ml |
|
C |
33 μl |
从B管取66 μl |
1000 μg/ml |
|
D |
33 μl |
从C管取66 μl |
750 μg/ml |
|
E |
33 μl |
从D管取66 μl |
500 μg/ml |
|
F |
50 μl |
从E管取50 μl |
250 μg/ml |
|
G |
50 μl |
从F管取50 μl |
125 μg/ml |
|
H |
80 μl |
从G管取20 μl |
25 μg/ml |
|
J |
100 μl |
0 μl |
0 μg/ml |
2. 蛋白浓度测定
a. 96孔酶标板测定
① 取5 μl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。
② 取5 μl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5 μl，需加标准品稀释液补足到5 μl。请注意记录样品体积。
③ 各孔加入250 μl EZ-Bradford Reagent (Detergent Compatible)。
④ 室温震荡孵育10 min。
⑤ 用酶标仪测定在595 nm处的吸光度。
⑥ 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品中的蛋白浓度。
b. 标准比色皿测定
① 各取20 μl不同浓度标准品和待测样品加入到比色皿中。
② 加入1 ml EZ-Bradford Reagent (Detergent Compatible)。
③ 混匀，室温孵育10 min。
④ 将分光光度计设定到595 nm，用装满水的比色皿对仪器校零，测定所有样本的吸光度。
⑤ 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品中的蛋白浓度。
相关详细信息，请查看产品说明书。
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文献和实验速度最好是选用 Bradford 法了。但是，Bradford 也存在一些问题，比如标准曲线线性相关性不佳，容易受 Triton，SDS 等去垢剂的影响等等。好在我们都是站在前人的肩膀上，前人早已开发出去垢剂兼容型的 Bradford 试剂，性能优于常规 Bradford 法，比 BCA 法更快更方便。今天我们讨论的方法就是基于去垢剂兼容型的 Bradford 试剂来快速蛋白定量。不知道上哪里买的同学可以在丁香通上找找。下图就是用 Bradford 法测出的标准曲线。虽然线性拟合不佳（R
的标准蛋白作标准品。如果只需要相对蛋白浓度，那么任何一种纯化蛋白均可作为对照标准品。 Bio–Rad 提供两种蛋白标准品，小牛gamma−球蛋白和牛血清白蛋白(BSA)标准品。当你用Quick Start Bradford和Bio–Rad 蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度时，那么标准品的选择就要慎重一些。如果你的样品中主要含有白蛋白，那么BSA将是一个好选择。如果你的样品包含了多种蛋白，gamma-球蛋白可能更合适。而DC和RC DC蛋白测定就几乎不受到标准品的影响，你爱选哪个选
目前常用比色法测定样品蛋白的含量：Bradford法（考马斯亮蓝法）、Lowry法（Folin-酚试剂法）、 BCA法等。但各有优缺点，大家可以根据具体情况选取。按相应蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大，大家可以根据具体情况选取。Bradford法（考马斯亮蓝法）:考马斯亮蓝G
