细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒 深红色荧光

Cell Meter 细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒 深红色荧光

货号	15295	存储条件	f/l
规格	100 Tests
Ex (nm)	593	Em (nm)	655
分子量		溶剂

产品简介

Cell Meter 细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒 深红色荧光是一种用于在活细胞或固定细胞中，通过荧光显微镜实时、定量检测细胞内NADH和NADPH总水平的强大工具。其核心特点是使用深红色荧光，这带来了多项关键优势。

与传统的蓝色荧光（例如NADH自身的紫外激发荧光）或绿色荧光探针相比，深红色荧光（通常激发/发射波长在~550-600 nm / ~600-700 nm范围内）具有显著优点：

更低的自发荧光：细胞成分（如胶原蛋白、黄素等）在蓝绿光区域会产生很强的背景荧光。使用深红色荧光可以极大地减少这种自发荧光干扰，从而获得更高信噪比、更清晰的图像。

更小的光毒性：高能量的短波长光（如紫外、蓝光）对细胞有损伤作用（光毒性）。深红色光的能量较低，对细胞更温和，更适合进行长时间的活细胞动态监测。

更好的组织穿透力：对于较厚的样本如3D细胞球或组织切片，深红色荧光比蓝绿光穿透能力更强，能获得更深层的信号。

易于多色标记：深红色荧光通道与常用的绿色荧光蛋白（GFP）、FITC、以及蓝色DAPI核染色通道光谱分离度大，非常适合与这些标记物进行多重荧光成像，同时观察NAD(P)H水平与细胞器结构或其他蛋白定位。

 

注意事项：

无法区分NADH和NADPH：这是此类探针的共同局限。它检测的是两者的总和。

定量性质：它提供的是相对定量，而非绝对浓度。通常通过比较不同处理组之间的荧光强度变化来得出结论。

需及时检测：特别是对于活细胞，清洗后应尽快成像，以免信号衰减或细胞状态改变。

产品说明书

实验样品示例

概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.将细胞与测试化合物和JJ1902 NAD（P）H传感器工作溶液在37℃孵育20  -  30分钟

3.将细胞洗净并保持在测定缓冲液中

4.在Ex / Em = 590/655 nm（截止= 610 nm）或使用Cy5®过滤器的荧光显微镜下监测荧光强度（底部读取模式）

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.制备工作溶液

将10μL JJ1902 NAD（P）H探针储备溶液（组分A）加入2.5mL测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。该JZL1707 NAD（P）H探针工作溶液在室温下1小时内稳定。

注意：40μL的JZL1707 NAD（P）H传感器原液足以用于一个板

 

2.实验步骤

①刺激NADP / NADPH，用10μL10X试验化合物（96孔板）或5μL5X试验化合物（384孔板）在无血清培养基或所需缓冲液（如PBS或HHBS）中处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的培养基或化合物缓冲液。

注意：JJ1902 NAD（P）H探针在血清存在的情况下也是兼容的。探针的条件优化是强烈推荐的细胞系到细胞系。

②在细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液。将细胞与测试化合物和JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液在37℃共孵育20-30分钟，避光。

注意：对于NADH / NADPH阳性对照处理：将HeLa细胞与100μMNADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液在37℃下共培养30分钟。 详细信息请参见图1。

③用所需缓冲液洗涤细胞一次。移除每个孔中的溶液，并添加100μL/孔的测定缓冲液（组分B）用于96孔板或25μL/孔用于384孔板。

④使用底板读取模式在Ex / Em = 590 / 655nm（截止= 610 nm）下使用酶标仪监测荧光增加，或使用荧光显微镜和Cy5®过滤器过滤器获取图像。