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大量
- 英文名:
100×Hoechst 33342 Staining Solution
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件:
RT
- 规格:
1ml
中文名:100×Hoechst 33342染色液
英文名:100×Hoechst 33342 Staining Solution
CAS:N/A
级别:N/A
分子量:N/A
分子式:N/A
纯度:N/A
储存条件:-20℃产品简介
Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,对细胞的毒性较低。常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。也用于普通的细胞核染色,或常规的DNA染色。Hoechst-DNA的激发和发射波长分别350nm和460nm。
本Hoechst 33342染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色,也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。
使用方法
1. 对于固定的细胞或组织
a. 对于细胞或组织样品,固定后,适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色,则先进行免疫荧光染色,染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色,则直接进行后续的Hoechst 33342染色。
b. 对于贴壁细胞或组织切片,加入少量用免疫染色洗涤液、PBS或生理盐水稀释至1×的本产品,覆盖住样品即可。对于悬浮细胞,至少加入待染色样品体积3倍的1×染色液,混匀。室温放置3-5分钟。
c. 吸除Hoechst 33342染色液,用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次,每次3-5分钟。
d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时,会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染。
2. 对于活细胞或组织:
a. 对于培养器皿内的活细胞或组织,在培养液中均匀滴加适量的Hoechst 33342活细胞染色液(100×)至终浓度为1×,轻柔混匀。例如对于十二孔板中培养的细胞,每孔有1ml的培养液,每孔需要加入10μl Hoechst 33342活细胞染色液(100X)。培养液中的血清、酚红等都不会对染色产生干扰。
b. 在适宜于细胞培养的温度培养20-30分钟。弃染色液,用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。
注意事项:
1、荧光染料易淬灭,建议染色后尽量当天完成检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。
2、为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液x
3、 Hoechst 33342对人体有害,请注意适当防护。请穿实验服并戴一次性手套操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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文献和实验附录I 染色液的配制 一、吕氏(Loeffler)碱性美蓝染液 (实验6,53) A液:美蓝(methylene blue) 0.6g 95%酒精 30ml B液:KOH 0.01g 蒸馏水 100ml 分别配制A液和B液,配好后混合即可。 二、齐氏 (Ziehl)石炭酸复红染色液 (实验6) A液:碱性复红(basic
四、醋酸洋红染液 将洋红粉末1g倒入100mL45%醋酸溶液中,边煮边搅拌,煮沸(沸腾时间不超过30s),冷却后过滤,即可使用。也可再加入1%~2%铁明矾水溶液5-10滴,至此液变为暗红色而不发生沉淀为止。如制作永久标本染色时,可加入饱和氢氧化铁或醋酸铁(媒染剂)溶液数滴,至染色液呈浅蓝色为止。 五、硫堇染液(工作液) ①干液(硫堇):硫堇1g或2g溶于100mL 50%乙醇中,溶解后过滤备用; ②醋酸钠缓冲液:醋酸钠・3H2O 9.7g,巴比
双苯咪唑类的Hochest-33342和33258及 JC-1染色
可直接离心收集(1 000r/min,5min)。对于贴壁生长的细胞可以先收集细胞培养液(可能含有因凋亡而悬浮的细胞),再用胰酶消化贴壁细胞,然后将两者合并,离心收集细胞并用1×PBS洗细胞沉淀物。 (3)固定:细胞沉淀物悬浮在300ul甲醛(4%)中固定30min,然后经PBS洗涤后离心收获细胞。 (4)染色:细胞在100ul Hoechst-33342(sigma)中染色10min,然后将细胞悬液滴在载片上,盖上盖玻片,用荧光显微镜观察并拍照
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