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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温冷藏
- 保质期:
详见说明书
- 英文名:
Lamp kit for tile mite
- 库存:
36
- 供应商:
上海谷研
1.仪器:分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器(2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯(DEPC)水 处理的灭菌离心管、吸头(10 µL、200 µL、1000 µL)、灭菌双蒸水。
转录因子sox9a抗体 现货供应 英文名称: Sox9a
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Sgk3抗体 现货供应 英文名称: SGK3
分泌型白细胞蛋白酶抑制因子抗体 现货供应 英文名称: SLPI
2,4-二氯苯氧乙酸单克隆抗体 现货供应 英文名称: 2,4-D
尿素转运型糖蛋白抗体 现货供应 英文名称: SLC14A1
雌激素诱导的转录调制器抗体 现货供应 英文名称: SLTM
2,4-二氯苯氧乙酸抗体 现货供应 英文名称: 2,4-D
5-羟色胺受体1A抗体 现货供应 英文名称: 5-HTR1A
5羟色胺抗体 现货供应 英文名称: 5-HT/5 Hydroxy Tryptophan
5-羟色胺受体1B抗体 现货供应 英文名称: 5-HTR1B
神经突触素2抗体 现货供应 英文名称: Synapsin II
环指蛋白142抗体 现货供应 英文名称: RNF142
突触结合蛋白3抗体 现货供应 英文名称: SYT3
突触相关蛋白25抗体 现货供应 英文名称: SNAP25
细胞因子信号传导抑制蛋白1抗体 现货供应 英文名称: SOCS1
超氧化物歧化酶1抗体 现货供应 英文名称: SOD1
超氧化物歧化酶2抗体 现货供应 英文名称: SOD2
生长抑素抗体 现货供应 英文名称: Somatostatin 28
胚胎干细胞关键蛋白抗体 现货供应 英文名称: SOX2
生长抑素受体4抗体 现货供应 英文名称: SSTR4
Smad4抗体 现货供应 英文名称: Smad4
Smad7抗体 现货供应 英文名称: Smad7 + Smad6
Shh信号转导通路膜蛋白受体抗体 现货供应 英文名称: Shh
前列腺跨膜上皮1抗原抗体抗体 现货供应 英文名称: STEAP1
雌激素调节蛋白LIV1/锌转运蛋白抗体 现货供应 英文名称: SLC39A6
垂体肿瘤转化基因抗体 现货供应 英文名称: Securin
猪水肿素菌体蛋白抗体 现货供应 英文名称: Shiga-Like Toxin Type II Variant
S-腺苷蛋氨酸脱羧酶抗体 现货供应 英文名称: SAMDC
5-羟色胺受体2B抗体 现货供应 英文名称: 5-HTR2B
视黄酸激活基因8抗体 现货供应 英文名称: Stra8
平滑肌肌球蛋白重链抗体 现货供应 英文名称: SMMHC
新型血小板相关血管内皮分泌蛋白SCUBE1抗体 现货供应 英文名称: SCUBE1
双链RNA结合蛋白Staufen抗体 现货供应 英文名称: Staufen
突触结合蛋白12抗体 现货供应 英文名称: Synaptotagmin XII
大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型突变体抗体 现货供应 英文名称: Shiga-like toxin IIe variant subunit A
雅氏瓦螨LAMP试剂盒泛素连接酶Siah1抗体 现货供应 英文名称: SIAH1
磷酸化细胞信号转导分子Smad-1抗体 现货供应 英文名称: Phospho-Smad1
磷酸化5-脂氧合酶抗体 现货供应 英文名称: Phospho-5-Lipoxygenase
磷酸化5-脂氧合酶抗体 现货供应 英文名称: Phospho-5-Lipoxygenase
应激诱导分泌蛋白1抗体 现货供应 英文名称: SISP1
特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单,定量准确快速。
2. 引物经过优化,特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照,便于分析试验结果。
使用方法:
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。 2.加样(样本处理区) 3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
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文献和实验释放酶活;一类是抗体法修饰的热启动酶,如 Champagne Taq ,预变性 95℃30s 即可释放酶活。使用时注意预变性时间,方能获得满意的扩增效果。 2. 选择 Lamp 扩增长片段 大于 5Kb 的长片段又该如何扩增呢?如果实验对保真度的需求不高,那么就可以使用 LAmp DNA 聚合酶。其保真度是 Taq 酶的 6 倍,可扩增超过 20Kb 的基因组、cDNA 片段,对于低拷贝、低纯度、以及不同 GC 含量的模板都具有很高的成功率。 3. 选择高保真酶快速高效扩增 如果实
组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注,短短几年,该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中,在这次甲型H1N1流感事件中,日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。通过荣研公司近十年的推广,LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中,并得到了欧美国家的认同。LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外,操作十分简单,对仪器设备要求低,一台水浴锅或恒温箱就能实现反应,结果的检测也很简单,不需要像PCR
做LAMP实验有一年多的时间了,其间共做了3个关于LAMP的课题,目前为止基本没有污染~尤其是自己的毕业论文,用完了500uL的 FIP,全部开盖跑电涌,没有一次污染。今天为止做完了所有毕业实验,坐下来总结一下自己的心得~~我只是个小硕士生~~所以都是在浅显的方面叙述,希望大家不要鄙视~~首先感谢一下LAMP交流群,没有这么多老师和同伴在,我不可能顺利毕业。比较可惜的是群里现在人满了。下面开始正文~~1. 引物我一共用过8组引物,所有课题加起来。primerexplorer的引物有效性最高
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