水泡性口炎病毒RT-LAMP试剂盒

水泡性口炎病毒RT-LAMP试剂盒需要自备的器材：
1．仪器：分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水 处理的灭菌离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、灭菌双蒸水。

 用于霍乱弧菌，副溶血弧菌的分离和初步鉴别    
科玛嘉李斯特氏菌显色培养基    规格:     1000ml/瓶    作用：        
科玛嘉ECC显色培养基    规格:     1000ml/瓶    作用：     用于大肠杆菌和大肠菌群的鉴定和计数    
科玛嘉尿道细菌显色培养基    规格:     1000ml/瓶    作用：     尿道菌检测    
科玛嘉念珠菌显色培养基    规格:     1000ml/瓶    作用：     念珠菌计数    
科玛嘉大肠杆菌显色培养基    规格:     1000ml/瓶    作用：        
科玛嘉大肠杆O157菌显色培养基    规格:     1000ml    作用：     此培养基用于分离和鉴定大肠杆菌O157    
科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基    规格:     1000ml/瓶    作用：        
科玛嘉沙门氏菌显色培养基    规格:     1000ml/瓶    作用：     沙门氏菌检测    
法国科玛嘉显色培养基    规格:     1000ml/瓶    作用：        
一级目录：显色培养基    规格:        作用：    二级目录：显色培养基    
酵母葡萄糖氯霉素琼脂    规格:     250g    作用：     用于牛奶和乳制品中霉菌及酵母菌总数测定    
麦芽浸膏汤    规格:     250g    作用：     用于酵母和霉菌的培养，还用于酸性罐头食品商业无菌检验(GB/T4789.26-2003)。    
麦芽汁培养基    规格:     250g    作用：     用于酵母菌的增菌培养    
麦芽汁琼脂培养基    规格:     250g    作用：     供酵母菌的培养、鉴定及保存菌种用。    
1%聚山梨酯80-玉米琼脂培养基    规格:     100g    作用：     用于白色念珠菌芽管试验的培养    
酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)    规格:     250g    作用：     用于酵母菌的培养，及供药品和生物制品中含王浆和蜂蜜的合剂酵母菌数测定用。    
沙氏葡萄糖琼脂培养基    规格:     250g    作用：     用于白色念珠菌的培养。    
沙氏葡萄糖肉汤培养基    规格:     250g    作用：     沙氏葡萄糖液体培养基用于白色念珠菌的培养。    
沙氏液体培养基    规格:     250g    作用：     用于真菌的增菌培养，还用于一次性使用卫生用品真菌定性检测    
沙氏琼脂培养基    规格:     250g    作用：     用于真菌的分离培养，还用于一次性使用卫生用品真菌菌落总数检测    
霉菌液体培养基    规格:     250g    作用：     用于霉菌、酵母的增菌和培养    
马铃薯琼脂    规格:     100g    作用：     用于霉菌的培养    
马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA)    规格:     250g    作用：     供霉菌和酵母菌计数及分离培养    
改良马丁琼脂培养基(真菌营养琼脂培养基)    规格:     250g    作用：     用于真菌培养及药品和生物制品无菌检查用    
改良马丁培养基 (真菌培养基)    规格:     250g    作用：     用于真菌培养及药品和生物制品无菌检查用。    
高盐察氏培养基    规格:     250g    作用：     用于饲料中霉菌的检验    
察氏培养基    规格:     250g    作用：     用于培养能以硝酸盐作为唯一氮源的真菌和细菌，及青霉和曲霉等霉菌的分离
特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板，操作简单，定量准确快速。
2. 引物经过优化，特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照，便于分析试验结果。
水泡性口炎病毒RT-LAMP试剂盒使用方法：
注：所有试剂使用前需完全解冻，混合均匀，6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理（样本处理区）
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等，具体提取方法请参照相关说明书；阳性质控品及阴性质控品无需提取，可直接使用。
2. 扩增试剂准备（PCR前准备区）
取N个（N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品）PCR反应管，每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量，两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD  RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s，转移至样本处理区。 2.加样（样本处理区） 3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl，盖紧管盖，于6,000rpm离心10s，转移至扩增区。

反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。