高位12道加样槽及板

（原创）蛋白质的双向电泳实验方法 （请加分）

装置的上面部分，向电极装置挤压它使下面一部分固定。3．在平板凝胶表面加IEF凝胶：从平衡缓冲液中取出凝胶条，纵向放到厚有机玻璃板的边缘，尽量使凝胶条与加样槽的边缘靠近。使用小刮勺，将凝胶条轻轻向下推，使之小心的滑入加样槽。凝胶条必须位于SDS-PAGE的表面，没有气泡。4．使用Pasteur移液管，将加样槽加满40℃的琼脂糖溶液（没有气泡），2分钟后，琼脂糖溶液应凝固。5．在电极装置装入凝胶“三明治”以后，将BioRad槽注入620ml电极溶液，加溶液的时候避免泡沫和气泡的形成。内槽中电极缓冲

WB操作规程

用去离子水洗涤加样槽以除去未聚合的丙烯酰胺。把凝胶固定于电泳装置上，上下槽各加入Tris甘氨酸电泳缓冲液。 3．SDS-PAGE电泳 ① 将抗原（细胞裂解液、重组蛋白）样品置于凝胶加样缓冲液中，在100℃加热三分钟以使蛋白质变性。 ② 设计加样顺序，作好实验记录，按预定顺序加样。一般每个电泳道加样最大体积为25µl,每个电泳道上样的最低蛋白质量（每一条蛋白质条带）：0.1µg（考马斯亮蓝染色）-2ng（银染色）,最高蛋白质量（蛋白质混合物）：20-40µg。

蛋白质的双向电泳实验方法

分固定。 3． 在平板凝胶表面加 IEF 凝胶：从平衡缓冲液中取出凝胶条，纵向放到厚有机玻璃板的边缘，尽量使凝胶条与加样槽的边缘靠近。使用小刮勺，将凝胶条轻轻向下推，使之小心的滑入加样槽。凝胶条必须位于 SDS-PAGE 的表面，没有气泡。 4． 使用 Pasteur 移液管，将加样槽加满 40 ℃的琼脂糖溶液（没有气泡）， 2 分钟后，琼脂糖溶液应凝固。 5． 在电极装置装入凝胶“三明治”以后，将 BioRad 槽注入 620ml 电极溶液，加