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- 2025年07月11日
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文献和实验，无菌复溶 9. 淋巴细胞M密度梯度分离液（Accurate Chemical and Scientific），室温 10. RPMI-10完全培养基 11. FITC标记的抗CD3抗体和PE标记的PK136抗体（PharMingen） 12. 15ml和50ml带盖聚丙烯锥底离心管 13. Beckman CS-6R离心机（或同类离心机） 14. 血清学吸管 实验方法： 1. 处死小鼠，无菌取脾脏。 2. 制备脾脏
溶液Ⅲ(冰上预冷)，盖紧管口，颠倒数次使混匀。 7.1200rpm，离心15 min，将上清转至另一离心管中。 8.向上清中加入等体积酚：氯仿(去蛋白)，反复混匀，12000rpm，离心5min,将上清转移到另一离心管中. 9.向上清加入2倍体积乙醇,混匀后,室温放置5-10min。12000rpm离心5min。倒去上清液，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。 10.用1ml70%乙醇洗涤质粒DNA沉淀，振荡并离心，倒去上清液，真空抽干或空气中干燥
本法的产量低得多，但却比其他方法更温和，是提取大质粒（大于15kb）的首选方法。 试验步骤： 1. 将500ml细菌沉淀物洗过后重悬于10ml用冰预冷的10%蔗糖、50mmol/L Tris.Cl(pH8.0)溶液中，将悬液移至30ml的带盖螺口塑料试管中。 2. 加入2ml新配制的溶菌酶溶液[10mg/ml,溶于10mmol/L Tris.Cl(pH8.0)]。当溶液的pH值小于8.0时，溶菌酶不能有效地发挥作用。 3. 加8ml 0.25mol/L EDTA(pH
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