15ml锥底螺口带盖离心管，带支架，灭菌

质粒DNA的提取与鉴定

溶液Ⅲ(冰上预冷)，盖紧管口，颠倒数次使混匀。 7.1200rpm，离心15 min，将上清转至另一离心管中。 8.向上清中加入等体积酚：氯仿(去蛋白)，反复混匀，12000rpm，离心5min,将上清转移到另一离心管中. 9.向上清加入2倍体积乙醇,混匀后,室温放置5-10min。12000rpm离心5min。倒去上清液，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。 10.用1ml70%乙醇洗涤质粒DNA沉淀，振荡并离心，倒去上清液，真空抽干或空气中干燥

BSL-3 实验室操作准则

人签订责任书，做到双人双锁保管。 4．实验中不得不使用玻璃制品和锐器时，应通过镊子等工具夹取，尽量避免直接用手接触。操作液体材料时，要使用吸液球或机械移样器吸取液体，且动作应准确、轻柔，避免产生气溶胶或滴溅。 5．必须使用螺口可密闭的离心管或试管进行离心。操作时应先在生物安全柜内装入待离心的液体，平衡后拧紧离心管螺盖，用酒精棉球擦拭离心管外部，进行表面消毒后，放置离心机内离心或用 仪器 设备进行操作。离心及使用 仪器 设备都必须及时

从小鼠脾脏分离小鼠天然杀伤细胞

，无菌复溶 9. 淋巴细胞M密度梯度分离液（Accurate Chemical and Scientific），室温 10. RPMI-10完全培养基 11. FITC标记的抗CD3抗体和PE标记的PK136抗体（PharMingen） 12. 15ml和50ml带盖聚丙烯锥底离心管 13. Beckman CS-6R离心机（或同类离心机） 14. 血清学吸管 实验方法： 1. 处死小鼠，无菌取脾脏。 2. 制备脾脏