- ￥600 - 850
- 泽叶生物
- ZY2401
- 中国/上海
- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
18
- 英文名：
pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体
- 保质期：
可于-20℃长期保存（>2年），已经溶解后，请-60℃以下保存（3个月）
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件：
可于-20℃长期保存（>2年），已经溶解后，请-60℃以下保存（3个月）
- 规格：
盒
| pUC57 Simple通用克隆载体采用了TOPO酶连接技术，载体预先偶联上TOPO酶，当加入PCR扩增产物后，5 min就可以完成连接反应，连接阳性率高。pUC57 Simple通用克隆载体消除了大部分的常用酶切位点，便于后续亚克隆。该产品适用于Taq酶扩增的含“A”尾巴和高保真酶扩增的PCR产物的连接，载体含有氨苄青霉素抗性筛选标记。 | ||||||||||||||||||
优势 |
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组分 |
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储存 |
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| RTS DH5α冻干感受态在未溶解状态下，可于-20℃长期保存（>2年），已经溶解后，请-60℃以下保存（3个月）。 | ||||||||||||||||||
图谱 |
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测序引物 |
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| 正向测序引物：M13F(-47): 5’- CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’； 反向测序引物：M13R(-48): 5’- AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3’； |
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实例 |
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| 1.应用pUC57 Simple TA平端通用克隆载体分别连接长度为2008bp的平端产物和A尾产物，挑20个菌进行菌检，阳性率分别为95%和85%。 | ||||||||||||||||||
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| 2.不同的载体与片段的摩尔比对连接效率的影响 片段长2432bp，使用载体与片段摩尔比分别为1:1；1:2；1:3；1:4；1:5；1:6；1:7；1:8；1:9；1：10 室温连接5min后转入RTS-DH5α冻干感受态，通用引物菌检阳性片段长度为菌检阳性片段大小为2572bp。结果表明载体与片段摩尔比1:1；1:2；1:3；1:4；1:6；1:9时均有较高的阳性率，而1:5；1:7；1:8；1：10则阳性率稍低，说明连接反应时应选择正确的载体与连接片段摩尔比，推荐最佳摩尔比为1:3。 |
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| 3.不同连接时间对连接效率的影响 平端产物片段长2432bp，载体与片段摩尔比分别为1:3，分别室温连接5min、10min、15min、20min、25min、30min后转入RTS-DH5α冻干感受态，通用引物菌检阳性片段长度为菌检阳性片段大小为2572bp。结果表明不同的连接时间对于菌斑数和阳性率的影响较小，无明显差别，建议当连接片段<2500bp时，可选择室温连接5min。 |
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| 4.不同长度的平端产物片段对连接效率的影响 平端产物片段长度分别为500bp、1kb、2kb和5kb，载体与片段摩尔比分别为1:3，前三个片段室温连接5min，5kb片段室温连接30min，转入RTS-DH5α冻干感受态，通用引物菌检。结果表明长片段连接后菌斑数较短片段减少，但阳性率无明显差别。 |
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| 5.不同长度的A尾产物片段对连接效率的影响 A尾产物片段长度分别为500bp、1kb、2kb、2.5kb和5kb，载体与片段摩尔比分别为1:3，前四个片段室温连接5min，5kb片段室温连接30min，转入RTS-DH5α冻干感受态，通用引物菌检。结果表明片段长度在500bp~2.5kb之间时阳性率无明显差别，当片段长度≥5kb时阳性率有所降低，此时应适当增加菌检数量。 |
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文献和实验回收试剂盒 Axygen 琼脂糖 Biowest DNA ladder Fermentas （2）X基因慢病毒载体的构建 X基因基因由Transheep全基因合成，构建于载体PUC57中。 PUC57-X基因 EcoRI/BamHI酶切结果： 酶切完成后进行胶回收 2. 载体用pCDNA3.1双酶切，酶切体系如下。 20ul酶切
TOPO克隆提供高效的一步法克隆策略，可以定向克隆平端PCR产物到入门载体。平端PCR产物定向克隆的效率>90%，从而简化了筛选。同时不再需要连接酶、PCR后续步骤或者限制性内切酶。目前有两种定向TOPO克隆载体。pENTR/D-TOPO 和pENTR/SD/ D-TOPO（表2和图3）有以下特点： 位于PCR产物插入位点两侧的attL重组位点可以与Gateway目的载体进行有效重组 通用M13位点便于测序 基于pUC的ori位点提供高产量质粒 大肠杆菌中卡那霉素（kanamycin
商品化的T载体有很多。本实验采用TaKaRa公司的pMDTM18-T Simple Vector。这个载体以pUC19载体为基础，消除了pUC18载体上的多克隆酶切位点，经EcoRⅤ酶切后在两侧的3＇端添上“T”制备而成（见附录1）。由于本载体上消除了多克隆酶切位点，克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。 【试剂与器材】
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