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- dojindo
- EX01
- 2026年03月19日
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- 文献和实验
- 技术资料
- CAS号：
外泌体膜染色试剂-绿色
- 库存：
外泌体膜染色试剂-绿色
- 英文名：
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green
- 供应商：
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green
- 规格：
5 samples
外泌体膜染色试剂-绿色
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green试剂盒
特点：
● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集● 回收率高● 多种颜色可供选择
概述
近年来研究发现，外泌体作为细胞外囊泡（Extracellular vesicle; EV）的一种，与癌症的恶化与转移密切相关， 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信，细胞摄入外泌体时的示踪技术非常重要，然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点（1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子，造成背景增高）。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料，并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色，可满足多重染色在内的各种实验需求。
技术情报
更准确地观察外泌体的动态
常用于染色外泌体的膜染色染料(S公司 产品P)，染料本身会引起凝集，产生不来源于外泌体的荧光聚点，导致外泌体的性质变化和背景上升等问题1)2)。
ExoSparkler系列中使用的染料(Mem Dye-Green，Red，Deep Red)不会引起荧光凝集，也几乎不影响外泌体的性质，因此可以更准确地观察外来体的动力学。
特点
特点1:荧光染料不会在细胞外聚集
将使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，并用荧光显微镜观察进入细胞内的外泌体。
结果，在用产品P(绿色或红色)染色的外泌体中，发现了疑似染料聚集的细胞外荧光亮点。
特点2：对外泌体的性质几乎没有影响
比较使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P（绿色或红色）染色前后的外泌体，通过测定NTA（纳米粒子跟踪分析）和zeta电位以确认外泌体的性质是否变化。
结果，确认使用产品P（绿色或红色）会因染色而引起的外泌体的变化。
而Mem-Dye系列（Green、Red、Deep Red）对外泌体的性质几乎没有影响。
特点3：外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
特点4：多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。
■实验条件
超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。
常见问题Q&A
| Q1：纯化外泌体建议用什么方法？ |
| A1：一般我们推荐使用超速离心法纯化外泌体。但是，免疫沉淀法和磁珠法纯化的外泌体也有过成功染色的实例。 目前，聚合物沉淀法纯化的外泌体由于有聚合物的残留会影响外泌体的染色，所以无法使用本试剂盒。 |
| Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？ |
| A2：我们公司在做染色后外泌体进入细胞的实验时，使用过MEM（Minimum Essential Medium）和DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）。目前我们公司一直采用的含血清培养基进行外泌体实验，暂时无法推荐无血清培养基。 |
| Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？ |
| A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。 |
| Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？ |
| A5:虽然在过滤膜上可以观察到颜色的残留，但是我们公司通过下面的实验验证了过滤膜上的回收产物里不含未反应的染料。 <实验条件> 超速离心法纯化的①含有外泌体（蛋白质含量10 µg）的缓冲液和②单纯缓冲液，分别按照试剂盒说明书记载的步骤进行染色操作。染色后的产物加入到HeLa细胞中（1.25×104 cells），4小时后进行荧光观察。 结果显示，单纯缓冲液染色后的回收产物加入到细胞后，没有观察到荧光，进而可证明回收产物中没有残留的染料。 |
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文献和实验最近科研界什么比较流行？外泌体（Exosomes）是当之无愧的热点话题。不论在肿瘤领域、神经科学领域还是代谢领域，都有大量的外泌体相关文章发表，以探究外泌体的功能和机制。 再梳理一下外泌体的基本知识。外泌体是一类大小为 30-150 nm、呈茶托状的由脂质双层膜包裹的细胞外囊泡，广泛存在于细胞培养上清及各种体液中，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、卵泡液、精液、心包液、乳汁等。外泌体内含有多种蛋白质（如 TSG101、HSP70 等）、核酸（DNA、RNA）和脂质（胆固醇、鞘磷脂
细胞膜染料+外泌体染料双染策略，彻底解决外泌体摄取实验中的假阳性问题
actin 摄取实验对比，图 Fig.4a 中可以看到 CellLINK 555 标记的清晰的红色膜轮廓，经过 EvLINK 505 标记后的绿色外泌体分散在细胞膜内；Yu 等使用 F-actin 标记细胞膜轮廓，PKH-67 标记外泌体，尽管共聚焦显微镜下观测到的外泌体明亮的绿色荧光，然而该绿色荧光呈弥散状分布，难以较好区分外泌体与细胞膜。 Fig.4 （a）EvLINK 505 标记的外泌体+CellLINK 标记细胞膜和（b）PKH-67 标记的外泌体+F-actin 标记细胞膜摄取
2) 从细胞中外泌体的荧光情况看，电转组里除了外泌体本身的绿色，还有 Bcl-2 siRNA 的红色标记，说明 Bcl-2 siRNA 通过电转被装载入外泌体中；而共孵育组中基本没有摄入 Bcl-2 siRNA，故通过电转法能将 siRNA 有效地装进外泌体中。 图七 电转组和共孵育组与细胞共培养24h后观察外泌体荧光情况 3)通过共聚焦显微镜观察电转组外泌体中 siRNA 的载入情况，从共聚焦显微镜拍摄的结果看，电转组外泌体中有进入了大量的 Bcl-2 siRNA。 图八 共聚焦显微镜检测外泌体中
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