RTS OrigamiB(DE3)感受态细胞

组分

储存

使用方法

1. 从-20°C冰箱中取出Nano E.coli Transfection Reagent彻底融化，放置于冰上。
注意：该试剂含长链带电化合物，允许反复冻融20次，使用完毕后继续-20°C保存。
2. 取50 μl Nano E.coli Transfection Reagent置于0.2 ml EP管中，加入10～100 ng质粒DNA（不可使用连接产物），枪头吹打混合均匀，冰上放置2min。
注意：放置时间不要超过30min，过长时间会导致核酸聚合，从而影响转化效价。
3. 将上述混合物（50 μl Nano E.coli Transfection Reagent和质粒DNA）加入到一支RTS表达感受态细胞干粉中，枪头轻轻吹打，彻底溶解细胞干粉，置于冰上15min。
注意：使用RTS 表达感受态细胞干粉前，轻甩干粉至管底部，如果发现干粉已经溶解则不可使用。
4. 置于42°C热激1min后，迅速置于冰上急冷2min。
5. 将热激完毕的感受态细胞转移到含有450 μl不含抗生素的SOC（或LB）培养基，37°C振荡（225 rpm）培养60min。使质粒上抗性标记基因表达，菌体复苏。
6. 取200 μl复苏菌液涂布到含相应抗生素的LB琼脂平板表面。
7. 将平板置于37°C培养，12~18小时后可出现菌落。
8. 获得的表达菌，可使用IPTG进行诱导表达，从而获得重组蛋白。