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- 信裕生物
- XY2303.
- 中国/上海
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
18
- 英文名：
5×Fast One-Step RNA Probe qPCR Mix
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件：
-20
- 规格：
250T/1000T×20 μl
5×Fast One-Step RNA Probe qPCR Mix
| 5×Fast One-Step RNA Probe qPCR Mix是采用探针法进行Real-Time PCR的专用试剂，适合于FAM/HEX/TET/JOE/ROX等双标记探针（本品也适用于Molecular Beacon探针）。其中5×Fast One-Step RNA TaqMan qPCR Mix是将热启动Fast Taq DNA聚合酶、MLV反转录酶、Rnase Inhibitor、反应Buffer、dNTP等试剂预混的一种5×浓度的单组分预混试剂。进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单，只需加入引物、探针、模板、水即可。该制品不含有ROX校正染料，适用于各种荧光标记探针，并且适用于各种定量PCR机型。 5×Fast One-Step RNA Probe qPCR Mix中的Fast Taq DNA聚合酶采用专有的热启动技术确保55℃以下没有任何活性，因此可在室温建立反应体系。Fast Taq DNA聚合酶具有卓越的扩增速度，因此满足快速PCR程序，通常在30min以内可以完成扩增反应。同时该聚合酶具有耐受杂质的能力，同样适用于粗制核酸样本的扩增反应。 |
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组分 |
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主要特征 |
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应用 |
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| RNA的相对定量检测。 | ||||||||
注意事项 |
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储存 |
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| 1. 长期保存，请避光置于-20℃或-70℃可保存３年。 2. 经常使用，融化后可置于4℃，可保存1年。 |
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反应实例 |
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| 以人MCF7细胞提取的总RNA（1.28 pg-20 ng）为模板，应用5xFast One-Step RNA Probe qPCR Mix直接进行qPCR，扩增结果如图A: 扩增曲线；B：标准曲线。1-8RNA模板分别为：20 ng、4 ng、0.8 ng、0.16 ng、0.032 ng、6.4 pg、1.28pg和H2O。 | ||||||||
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文献和实验几个复孔，选择重复性好的 CT 值参与计算。 （2）CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法：从以下几个方面进行问题的排查：①加样准确度；②移液器吸取液体的准确度；③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样，减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系，并且增加模板的稀释梯度，大体积加样。如：原液 cDNA 添加 1μl，可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍，添加 5μl，使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
Fast and reliable mini-prep RNA extraction from Neurospora crassa
distilled water, mix with 0.03 ml 3 M Na-acetate (pH 5.2) and 0.75 ml ethanol - Store at -20°C for 2 h or at -70°C for 30 min - Centrifuge for 10 min, 10,000 rpm - Discard the supernatant and wash the precipitate with 70 ethanol - Dry the RNA pellet
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用
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