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- 信裕生物
- XY2202
- 中国/上海
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
18
- 英文名：
5×Fast SYBR Green qPCR Mix
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件：
-20
- 规格：
250T/1,000T/10KT
5×Fast SYBR Green qPCR Mix
| 5xFast SYBR Green PCR Mix是采用SYBR Green 嵌合荧光法进行Real-Time PCR的专用试剂，本SYBR Green qPCR Mix将抗体封闭的热启动Taq DNA聚合酶、反应Buffer、dNTP、SYBR Green染料等试剂预混在一起，是一种5×浓度的单组分预混试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单，只需加入引物、模板、水即可。 5xFast SYBR Green PCR Mix中含有ROX校正染料，适合于需要ROX校正和无需ROX校正的各种定量PCR机型。 该制品中的DNA聚合酶为抗体封闭的Hot Start Taq DNA 聚合酶，该酶在50度以下无活性，只有95度条件下加热后才能完全恢复酶的活力。该试剂盒独特的反应缓冲液，可在宽范围中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。 |
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组分 |
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主要特征 |
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应用 |
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| RNA和microRNA的相对定量检测。 | ||||||||||
注意事项 |
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| 1.长期保存，请避光置于-20℃或-70℃可保存３年。 2.经常使用，融化后可置于4℃，可保存1年。 |
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储存 |
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| 请避光置于-20℃或-70℃可保存2年。 注：长期-20℃保存可能会出现沉淀，室温融化后混合均匀，不影响试剂性能。 | ||||||||||
实例 |
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| Fig. 以pUC57质粒为模板，将该模板进行8个4倍稀释，第8个稀释梯度中模板拷贝数为10 copy/μl,用5XFast SYBR Green qPCR Mix进行扩增检测，每个反应体系加模板2μl，如图所示，A：本制品在宽广的模板量区间内具有卓越的线性关系：扩增效率 97.7%，R2 =0.9994。 B：融解曲线。C：标准曲线。 | ||||||||||
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文献和实验SYBR Green Quantitative PCR Protocol
12μl of master mix for each well, plus some excess1 Rxn: 10μl SYBR Green Mix 52 Rxn: 520μl SYBR 0.4μl Forward Primer (10μM stock) 20.8μl F
几个复孔，选择重复性好的 CT 值参与计算。 （2）CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法：从以下几个方面进行问题的排查：①加样准确度；②移液器吸取液体的准确度；③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样，减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系，并且增加模板的稀释梯度，大体积加样。如：原液 cDNA 添加 1μl，可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍，添加 5μl，使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR扩增程序结束
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