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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
18
- 英文名:
RAPA3G SYBR Green qPCR Mix
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件:
-20
- 规格:
1ml/5ml/25ml
RAPA3G SYBR Green qPCR Mix
| RAPA3G SYBR Green qPCR Mix是采用SYBR Green 嵌合荧光法进行Real-Time PCR的专用试剂,本SYBR Green qPCR Mix将化学修饰的热启动RAPA3G DNA聚合酶、反应Buffer、dNTP、SYBR Green染料等试剂预混在一起,是一种2×浓度的单组分预混试剂。该制品配有单独的ROX内参染料,可用于需要ROX进行孔间校正的定量PCR仪。 RAPA3G DNA聚合酶为电子进化改造的第三代DNA聚合酶,其对杂质的耐受性能明显提升,包括乙醇、胍盐、肝素、SYBR Green染料、MLV,因此无论采用基因组DNA、反转录cDNA、纯度欠佳的核酸样本都具有理想的扩增效果。优化的反应Buffer和100%热启动性能,确保该试剂在信噪比、循环域值、线性度和灵敏度方面具有的性能。 |
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组分 |
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主要特征 |
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应用 |
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| RNA转录产物cDNA、基因组DNA、DNA病毒等相对定量检测。 | ||||||||||||||
储存 |
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| 请避光置于-20℃可保存3年。请避光置于-20℃以下可保存3年。该试剂经30次冻融后性能无下降,因此不使用时请置于-20℃避光保存。 | ||||||||||||||
反应实例 |
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| Fig. 以人Hela Total RNA的反转录产物进行GAPDH基因的定量PCR检测(7个数量级),模板量分别为100ng、10ng、1ng、100pg、10pg、1pg、100fg。结果可见RAPA3G SYBR Green qPCR Mix在7个数量级的动态检测中表现出卓越的扩增性能。R2=0.999;Eff%=101;Error=0.025. | ||||||||||||||
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文献和实验几个复孔,选择重复性好的 CT 值参与计算。 (2)CT<30,重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法:从以下几个方面进行问题的排查:①加样准确度;②移液器吸取液体的准确度;③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样,减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系,并且增加模板的稀释梯度,大体积加样。如:原液 cDNA 添加 1μl,可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍,添加 5μl,使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
做了快一年的SYBR G的定量实验了,有一些心得,写出来大家交流下. 也是今天在学校的BBS上有人推荐这里的,觉得很不错. 我们用的机器是ABI 7900,我自己比较喜欢的试剂是ABgene的QPCR sybr ROX MIX. 2*试剂我一般再进行稀释一倍后使用,反应总体系是10ul. 用SYBR G来做的话,引物非常重要. 我设计引物使用Primer 5,一般选择上游引物跨最后和最后第二个外显子,下游引物在最后一个外显子中,实在找不到,可以前移,但是一定保证至少一条
SYBR Green Quantitative PCR Protocol
the relative values for your gene of interest’s change in expression. SYBR qPCR Quick Protocol StandardsØ Dilute the cDNA ~4-fold (e.g. 21μl sample + 59μl H2 O = 80μl)Ø Pool an appropriate amount from each sample to create standard 1 (i.e. 30μl x
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