Ros, active; 10 μg

ROS的流式检测

刺激时间较长（通常为6小时以上）的细胞，先用活性氧阳性对照及自己感兴趣的药物刺激细胞，后装载探针。原位装载探针：本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1：1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA的体积为1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟

ROS的检测方法

探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。活性氧检测试剂盒[9]。荧光法检测线粒体产生和释放的反应性氧化物（ROS）[10]。羟基自由基的检测（二羟苄胺DHBAs和水杨酸盐Salicylate）[11] ROS was evaluated by the staining of 2’，7’- dichlorofluorescein diacetate（二氯荧光乙酰乙酸盐）.ROS production

Active Motif ChIP 实验专家技术经验分享：如何判断 ChIP 成功与否？

了，但具体还要依蛋白而定。比如 H3K4me3 的 ChIP，通常阳性区域比阴性区域的富集度要高 100 倍以上才可以认为做的不错，但对于很多与染色质结合不是很紧密的蛋白，比如一些转录因子，可能富集度有 10 倍差异就不错了。一般对于已有报道的蛋白的 ChIP，可以参考别人的报道来判断；而对于没有报道的蛋白 ChIP，一般能做出有 4～8 倍以上的差异，就可以初步认为成功了。具体富集度是怎么计算的呢？举个例子来说明：用作一个 ChIP 反应的起始样品叫做 Input，比如你用 20 ug 染色质去做一个